| Attribut | Détails |
|---|---|
| Numéro de chat | SN0020 |
| Taille | 50T / 100T |
| Stockage | Stocké à 4 ° C pour le stockage court. Pour un stockage plus long, le kit peut être stocké à -20 ° C ou -80 °C. |
Composants du kit
| Composants | 50T | 100T |
| Tampon de lyse | 100ml | 200ml |
| Réactif a | 2.5ml | 5ml |
| Tampon moyen | 25ml | 50ml |
| Tampon de magasin | 5ml | 10ml |
Description du produit
- Isole les noyaux purs des cellules et des tissus animaux (doux: Foie / cerveau, dur: muscle, cultivé)
- Applications: mort cellulaire (apoptose), signalisation, métabolisme & études de protéines
- Noyaux exempts de protéines & contamination par nucléase
Protocole
La préparation des échantillons:
- Tissus:
- Prendre 100 à 200 mg de tissu frais (foie, cerveau, cœur)
- Laver avec du PBS / solution saline, sec, Coupe en petits morceaux
- Homogénéisation avec un tampon LY10IS pré-refroidi 1 ml & 50µl réactif A (bain de glace, 20X)
- Cellules cultivées:
- Digérer et laver les cellules
- Centrifuger (5-10min, 800g), jeter un surnageant, collecter & compter les cellules
- Remettre en suspension 5×10^ 7 cellules dans un tampon de lyse pré-refroidi 1 ml
- Ajouter un réactif de 50 µl A, homogénéiser (bain de glace, 20-30X)
Isolement nucléaire:
- Transférer l'homogénat dans un tube à centrifugeuse de 1,5 ml.
- Centrifuger (5min, 700g, 4°C), jeter un surnageant (Les pellets nucléaires restent).
- Remettre en suspension un culot nucléaire avec un tampon de lyse pré-refroidi 0,5 ml.
- Transférer dans un nouveau tube contenant 0,5 ml de tampon moyen (en couches soigneusement).
- Centrifuger (5min, 700g, 4°C), jeter un surnageant (Les pellets nucléaires restent).
- Remettre en suspension la pastille nucléaire avec un tampon moyen de 5 ml.
- Centrifuger (10min, 1000g, 4°C), jeter un surnageant (Pullet de noyaux purifiés).
Stockage:
- Remettre en suspension les noyaux purifiés dans un tampon de magasin 50 à 100 μl ou un tampon souhaité.
- Les noyaux sont prêts à l'usage ou peuvent être stockés à -70 ° C
Remarques:
Assurer des noyaux complets:
- Basse température: Effectuez toute la procédure à basse température.
- Vitesse: Travailler rapidement tout au long du processus.
- Perturbation des cellules: La clé est de casser les cellules sans endommager les organites.
- Tissus: Utilisez un homogénéisateur en verre de petite capacité avec un pilon serré pour une homogénéisation efficace.
- Cellules cultivées: Briser les cellules adhérentes est plus difficile. Utilisez le petit homogénéisateur et le pilon serré pour des résultats optimaux.
Centrifugation:
- Calculez la vitesse centrifuge correcte (RPM) basé sur la force centrifuge relative souhaitée (RCF ou G-Force) en utilisant la formule:
- G = 1.11 x 10 ^ -5 x r x (RPM)^ 2
- g: FCR (g)
- RPM: Rotations par minute (quadrillé)
- R: Rayon du rotor (cm)
Applications en aval:
-
- Pour Western blot et 2D-PAGE, Lyse directement l'échantillon nucléaire en ajoutant du tampon de chargement.
Produits connexes
P1020 1 × PBS, Ph7.2-7.4, 0.01M.
P1015 FDS-Tampon de chargement de page,4×(avec la TNT)
Kit d'extraction mitochondriale SM0020
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