Kit d'analyse du glycogène
Note: Prenez deux ou trois échantillons différents pour la prédiction avant le test.
Équipement d'exploitation: Spectrophotomètre/lecteur de microplaques
Numéro de catalogue: BC0345
Taille:100T/96S
Composants:
Réactif d'extraction: 100mL×1, stockage à 4℃.
Régent Ier: Poudre × 1, stockage à 4℃.10 mg de glucose, ajouter 1 mL d'eau distillée pour le dissoudre avant utilisation. Dilué avec de l'eau distillée pour 0.1 mg/mL de solution de glucose pour veille, prêt à l'emploi. 0.1 mg/mL de solution étalon de glucose, stockage à 4℃.
Régent Ⅱ: Poudre × 1, stockage à 4℃.
Solution de travail: Verser 6 mL d'eau distillée dans le réactif Ⅱ et verser lentement 24 mL d'acide sulfurique concentré. Dissoudre et bien mélanger avant utilisation. Les réactifs non utilisés sont valables à 4 °C pendant une semaine.
Description du produit
Le glycogène est un polysaccharide de haut poids moléculaire composé d'unités glucose. C'est l'une des principales formes de stockage du sucre. Il est principalement stocké dans le foie et les muscles comme énergie de secours., et est appelé glycogène hépatique et glycogène musculaire, respectivement. Le glycogène peut réguler la concentration de glucose dans le sang. Le glycogène peut être synthétisé dans le foie lorsque la glycémie augmente. Quand la glycémie diminue, le glycogène hépatique est décomposé en glucose pour compléter la glycémie. Donc, le glycogène hépatique est important pour maintenir l’équilibre relatif de la glycémie. Le glycogène musculaire est une forme de stockage du glycogène dans les muscles. Lorsque beaucoup de sucre dans le sang est consommé pendant un exercice intense, le glycogène musculaire ne peut pas être décomposé directement en sucre dans le sang. Il doit d'abord être décomposé pour produire de l'acide lactique, qui circule vers le foie avec le sang, et transformé en glycogène hépatique grâce au glycogène glucose.
Principe de détermination: méthode anthrone. Le glycogène est extrait avec un extrait alcalin fort, et la teneur en glycogène est mesurée à l'aide d'une méthode à l'anthrone dans des conditions fortement acides.
Réactifs et équipements requis mais non fournis.
Spectrophotomètre/lecteur de microplaques, centrifugeuse de bureau, pipette de transfert, cuvette en verre micro/plaque 96 puits, mortier, acide sulfurique concentré (H2SO4) et eau distillée.
Procédure:
je. Extraction d'échantillons:
- Cellules ou bactéries: Collecter 5-10 millions de bactéries ou de cellules dans un tube à centrifuger, jeter le surnageant après centrifugation; ajoutez 0,75 ml de réactif d'extraction pour briser les bactéries ou les cellules par ultrasons (pouvoir 20% ou 200W, ultrasons 3s, 10s intervalle, répéter 30 fois) ); Transférer dans un tube de 10 ml, faire bouillir au bain-marie bouillant pendant 20 minutes (bien fermer pour éviter la perte d'eau), secouez le tube tous les 5 min pour bien mélanger; retirer le tube et laisser refroidir, prendre jusqu'à 5 ml avec de l'eau distillée et mélanger. Centrifuger à 8000g et 25℃ pendant 10min, prendre le surnageant pour le tester.
- Tissu: Pesez un échantillon de 0,1 à 0,2 g et mettez-le dans un 10 Tube ml, ajouter 0.75 mL de solution d'extraction, faire bouillir au bain-marie bouillant pendant 20 min (bien fermer pour éviter la perte d'eau), secouer le tube à essai tous les 5 min pour bien mélanger. Après que tous les tissus se soient dissous, sors le tube et refroidis, puis rattraper 5 mL avec de l'eau distillée. Centrifuger à 8000g et 25℃ pour 10 min, prendre le surnageant pour le tester.
II. Détermination procédure:
- Préchauffer le spectrophotomètre/lecteur de microplaques pour 30 min, ajuster la longueur d'onde à 620 nm, mettre à zéro avec distillé
- Tableau d'échantillonnage (ajoutez les régents suivants dans EPtube)
| Régent(µL) | Tube vierge (A1) | Tube standard (A2) | Éprouvette (A3) |
| Échantillon | 60 | ||
| Régent Ier | 60 | ||
| eau distillée | 60 | ||
| Régent Ⅱ | 240 | 240 | 240 |
Bien mélanger, placer dans un bain-marie bouillant pendant 10 minutes (bien fermer pour éviter la perte d'eau), cool, et prends 200 μL dans une cuvette en microverre/une plaque à 96 puits pour lire l'absorbance du tube blanc, tube standard, et tube de mesure à 620 nm, et enregistrez-les comme A1, A2, et A3. Le tube vierge et le tube standard ne doivent être testés qu'une seule fois.
III. Calcul:
- Poids de l'échantillon
Sorbitol (mg/g de poids frais) =(Cs×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)÷1.11
= 0,450×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W
- Concentration en protéines
Sorbitol (mg/mg prot) = (Cs×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1 × Cpr) ÷1.11
=0,09×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr
- Le nombre de bactéries ou de cellules:
Sorbitol（mg/104 cellule）= (Cs×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(nombre de bactéries ou de cellules×V1÷V2) ÷1.11
= 0,450×(A3-A1)÷（A2-A1)÷nombre de bactéries ou de cellules
1.11: C'est une constante que la teneur en glucose soit convertie en teneur en glycogène, C'est, la couleur de 111 Le µg de glucose avec le réactif anthrone est équivalent à celui de 100 µg de glycogène avec réactif anthrone.
Cs: la concentration d'étalon, 0.1 mg/mL V1: volume de l'échantillon, 0.06 ml;
V2: Volume total de l'échantillon, 5 ml;
Cpr: concentration en protéines de l'échantillon, mg/ml; W: Poids de l'échantillon, g
Nombre de bactéries ou de cellules: 104 comme unité, dix mille
Note:
Si A est supérieur à 1.4, diluer l'échantillon avec de l'eau distillée et le multiplier par le facteur de dilution correspondant dans la formule de calcul.
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Spécification technique:
La limite de détection: 0.002 mg/ml
La gamme linéaire: 0.003125-0.25 mg/ml
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