Sanshibio 2 × SYBR Green qPCR Mélange

Numéro d'article： EH003 Spécification：1Stockage ML: Stocker à -20 ° C

Présentation du produit：

• Réactif spécialisé pour le temps réel RAP en utilisant le SYBR Méthode de fluorescence verte I Dye.
• Contient une enzyme de démarrage à chaud à blocage d'anticorps pour supprimer l'amplification non spécifique causée par la dimérisation de l'amorce ou le recuit non spécifique des amorces dans des conditions à basse température.
• Améliore la spécificité de la réaction d'amplification.
• Caractéristiques d'efficacité d'amplification élevée, Spécificité et sensibilité de détection fortes, bonne stabilité, et une utilisation opérationnelle facile.
• Génère une courbe standard robuste dans une large gamme quantitative, permettant une quantification précise.
• Compatible avec une variété d'instruments de PCR quantitatifs de fluorescence, y compris ceux des biosystèmes appliqués, Eppendorf, Bio-rad, Roche, et d'autres marques domestiques.

Contenu du produit：

Note：

• Rox Reference Dye Corrige les erreurs de signal de fluorescence inter-eaux dans certains instruments d'amplification de PCR en temps réel.
• Rox Reference Dye I convient à ABI Prism 7000 / 7700/7300/7900HT et à étape un plus en temps réel PCR en temps réel.
• Rox Reference Dye II est compatible avec 7500 Système de PCR en temps réel, 7500 Système de PCR en temps réel rapide, Stratagene MX3000P, MX3005P, et mx4000.
• Les deux colorants de référence Rox I et II doivent être utilisés à une concentration finale de 1 × en réactions.
• Des instruments comme LightCycler, Thermal Cycler Di Système en temps réel II, et le système Smart Cycler ne nécessite pas l'utilisation du colorant de référence ROX.

Stockage:

Stocker à -20 ° C, avec une durée de conservation minimale de 12 mois.

Définition de l'activité:

En utilisant l'ADN du sperme mahi-mahi activé comme matrice / amorce, L'activité est définie comme 1 unité (U) de matériaux insolubles dans l'acide incorporés, en prenant 10 nmol de nucléotides à l'intérieur 30 minutes à 74 ° C.

Contrôle de qualité:

Ce produit a subi des tests de qualité et est exempt de l'activité de la désoxyribonucléase endonucléase, activité d'exonucléase de la désoxyribonucléase, et contamination de la ribonucléase. Le contenu résiduel de l'ADN génomique hôte est ci-dessous 10 copies.

Utilisations du produit:

Fluorescence en temps réel qpcr quantitatif (Méthode de teinture) amplifie l'ADN ou l'ADNc; Qpcr quantitatif absolu; Qpcr quantitatif relatif.

Mode d'emploi:

• Laisser les réactifs requis s'équilibrer à température ambiante jusqu'à dissolution complètement, Mélanger doucement (ne pas vortex), Utiliser après une brève centrifugation pour éviter une formation excessive de bulles et des cycles de gel répétés. Si utilisé fréquemment, stocker à 4 ° C. Préparez le mélange de réaction PCR en fonction des composants pressés vers le bas (Préparez le mélange de réaction sur une boîte à glace):

Note：Les quantités de chaque composant peuvent être ajustées en fonction des besoins réels. L'ajout de colorant de référence ROX doit être déterminé par les utilisateurs en fonction du modèle spécifique utilisé.

• En général, Une méthode en deux étapes peut être utilisée pour la réaction. Si l'amplification n'est pas satisfaisante avec la méthode en deux étapes, Une méthode en trois étapes peut être utilisée pour configurer le programme de réaction de PCR.

Note： Les conditions de réaction peuvent être ajustées et optimisées en fonction des besoins réels. Le programme de courbe de fusion doit être sélectionné et adapté en fonction de l'utilisation du programme de l'instrument d'amplification.

• Une fois la réaction terminée, Analyser la courbe d'amplification et les résultats de la courbe de fusion. Reportez-vous au manuel d'utilisation de l'instrument PCR en temps réel pour des méthodes d'analyse détaillées.

Précautions:

1. Veuillez sélectionner un recuit approprié (extension) températures basées sur la conception d'amorces, avec l'amorce TM généralement environ 60 ° C. Pour les amorces avec des températures de recuit plus basses, Une méthode en trois étapes est recommandée. La concentration finale des amorces utilisées peut être ajustée dans la plage de 0,2 à 1,0 μm. La concentration de matrice d'ADN peut être ajustée en fonction de sa concentration.
2. SYBR Green I Dye est un colorant non spécifique qui émet une fluorescence lors de la liaison à l'ADN double brin (ADNdb). Cependant, il est facilement dégradé sous une forte lumière. Donc, Lors de la conception d'amorces, il est important d'éviter autant que possible la formation de dimères d'amorce. Pendant l'utilisation, Une exposition prolongée à une forte lumière doit être évitée pour améliorer la précision des résultats, sensibilité, et spécificité.
3. L'augmentation de la concentration en ions magnésium peut réduire l'effet inhibiteur de SYBR Green I sur les réactions de PCR. Lors de l'optimisation des réactions de PCR de fluorescence à l'aide de ce produit, Il est conseillé d'augmenter légèrement la concentration en ions de magnésium (0.5-3.0mm plus élevé que les réactions de PCR standard).
4. Utilisez des zones et des pipettes dédiées avant et après l'amplification, porter des gants, et les changer fréquemment. Après avoir terminé la réaction de PCR, N'ouvrez pas les tubes de réaction pour minimiser la contamination de l'environnement de test avec des produits PCR.