Herpèsvirus du Pigeon (PiHV) Kit de test d'acide nucléique (UNG, Méthode de sonde PCR-fluorescente)

Numéro d'article: AP2409002 spécification: 50T/100T Stockage: -20℃

Présentation du produit:

Herpèsvirus du Pigeon (PiHV) est une maladie infectieuse virale affectant principalement les jeunes pigeons et causée par le type Pigeon Herpesvirus. 1 (PiHV1). Il s'agit d'un agent pathogène important conduisant au syndrome de la maladie du pigeonneau chez les jeunes pigeons.. Cliniquement, elle se caractérise par des symptômes tels qu'une inflammation nasale et conjonctivale. Les pigeons infectés peuvent également présenter une dépression, diminution de l'appétit, diarrhée, vomissement, et symptômes neurologiques. Donc, tôt, rapide, et une détection pratique du PiHV est cruciale pour le diagnostic, ralentir la propagation de la maladie, et prévenir les complications. Ce kit de test est conçu sur la base des séquences conservées dans le gène PiHV, avec des conditions optimisées, permettant une quantification fluorescente précise RAP test oral, écouvillons cloacaux, sang, et autres échantillons de tissus d'oiseaux. Cela permet de déterminer rapidement si l'hôte est infecté par le PiHV..

Contenu du produit:

Composants réactifs	AN2409002-02 (50T)	AN2409002-03 (100T)
Réactif de test PiHV	1150µL	1150µL× 2
Contrôle positif PiHV	100µL	100µL
Contrôle négatif	100µL	100µL

Conditions de stockage:

Conserver à -20℃, la durée de conservation est d'au moins 12 mois.

Opération expérimentale:

1. La préparation des échantillons (Zone de préparation des échantillons)

1.1 Exemples d'exigences:

-Écouvillonnage oral/clocal: Utilisez un coton-tige stérile à insérer dans la gorge ou le cloaque de l’oiseau., tournant trois fois. Retirez-le et placez-le dans un tube à centrifuger, couper la partie exposée, puis bouchez solidement le tube et étiquetez-le. Échantillons pouvant être testés dans 24 les heures peuvent être conservées à 2-8°C; les échantillons qui ne peuvent pas être testés rapidement doivent être conservés à -20°C.

-Sang total: Utiliser l'EDTA comme anticoagulant; ne pas utiliser d'héparine. Du sang total frais est requis, ou il peut être conservé à 2-8°C pendant pas plus de 7 jours, ou à -20°C pendant pas plus de 3 mois. Les cycles répétés de gel-dégel doivent être évités autant que possible..

-Tissu: Prélever du tissu hépatique frais ne dépassant pas 100 mg, et préparer un homogénat de tissu en utilisant 200 à 500 μL d'eau stérile pour la préparation ultérieure des échantillons.

1.2 La préparation des échantillons:

Référez-vous à Sanshibio “Kit d'extraction rapide d'ADN du génome animal (pour analyse PCR) Manuel” (Numéro de catalogue: DP202), ou d'autres kits/méthodes d'extraction d'acide nucléique qui répondent aux exigences pertinentes, pour extraire les acides nucléiques des échantillons traités. Les échantillons d'acide nucléique extraits doivent être placés dans une glacière et testés dès que possible; ils peuvent être conservés à 4°C pendant une durée maximale 7 jours ou à -20°C pendant pas plus de 6 mois.

2. Préparer le système de réaction (Exemple de zone d'ajout)

2.1 Sortez chaque composant du kit, décongeler complètement à température ambiante, et centrifugeuse pour 10 secondes pour collecter le liquide des parois du tube et des bouchons au fond. Préparer le système réactionnel en fonction du nombre d’échantillons (n+2) (c'est-à-dire, n échantillons de test + 1 contrôle positif + 1 contrôle négatif). Spécifiquement, préparer (n+2) Tubes PCR, distribuer 23 μL du réactif de test PiHV dans chaque tube, et conservez-les dans une glacière pour une utilisation ultérieure.

2.2 Alors, ajouter séquentiellement 2 μL du contrôle négatif, échantillon d'acide nucléique extrait, et le contrôle positif PiHV au réactif de test. Bouchez solidement les tubes et enregistrez les informations; le volume total pour chaque réaction doit être de 25 μL. Bien mélanger, centrifugeuse pour 10 secondes, et mener l'expérience d'amplification dans l'instrument PCR.

3. Amplification PCR (Domaine d'amplification et d'analyse de produits)

50°C Décontamination enzymatique UNG pour 2 minutes; 95Pré-dénaturation °C pour 2 minutes; 95Dénaturation °C pour 10 secondes, suivi d'un recuit à 60°C et d'une extension pendant 35 secondes, pour 40 cycles, collecter des signaux de fluorescence à 60°C. Sélectionnez le canal de fluorescence FAM (si vous utilisez la série ABI ou des instruments PCR quantitatifs en temps réel similaires, contactez le fabricant à l'avance si nécessaire ou ajoutez vous-même le colorant d'étalonnage ROX; sinon, suivre la procédure normale).

4. Détermination du résultat

4.1 Conditions de validation des résultats expérimentaux:

Valeur Ct du canal FAM du contrôle positif < 28 et expose un “S” courbe d'amplification en forme; le contrôle négatif n’a pas de valeur Ct ou une valeur Ct ≥ 38 et non “S” courbe d'amplification en forme, indiquant des résultats valides; sinon, répéter l'expérience. Si le nouveau test reste invalide, veuillez contacter le personnel technique du fabricant.

4.2 Détermination du résultat de l'échantillon:

Valeur CT ≤ 33 et expose un “S” courbe d'amplification en forme, jugé positif au PiHV;

Valeur CT 33 < CT < 38 est considéré comme suspect; il est recommandé de refaire un test (l'extraction de l'acide nucléique peut être de qualité inférieure ou contenir de puissants contaminants inhibiteurs (par exemple., résidus de désinfectants, anticoagulants) inhibition de l'amplification; suggérer de retraiter l’échantillon pour l’extraction et l’amplification de l’acide nucléique; exclure d’abord les résultats faussement positifs causés par une contamination par aérosol avant de réextraire les acides nucléiques et de refaire les tests). Si la contamination par aérosol est exclue et que le canal FAM reteste la valeur Ct < 33 avec une courbe d'amplification claire, il est déterminé comme PiHV positif; sinon, il est déterminé comme négatif;

Aucune valeur Ct ou valeur Ct ≥ 38 et non “S” la courbe d'amplification en forme est déterminée comme PiHV négative.

Précautions:

• Pour éviter les contaminations, l'expérience doit être strictement cloisonnée, et l'isolement physique entre les cloisons est préférable pour éviter la contamination croisée due à des facteurs humains. Portez des blouses de laboratoire et des gants en latex pendant l'expérience, utiliser les outils de manière indépendante dans différents domaines, changer de gants et de blouses de laboratoire si nécessaire. Après PCR, n'ouvrez pas le couvercle immédiatement; ouvrez-le après un refroidissement suffisant pour minimiser la contamination par les aérosols.
• Décongeler complètement les réactifs avant utilisation, mais évitez les cycles répétés de gel-dégel. Les tubes de réaction PCR fournis dans le kit font 0,2 ml; si un remplacement est nécessaire, transfert après décongélation complète. Suivez strictement les instructions de préparation des réactifs et d’ajout d’échantillons. Postes de travail, centrifugeuses, pipettes, et les autres instruments doivent être désinfectés régulièrement avec des désinfectants contenant du chlore, alcool, agents de décontamination des acides nucléiques, ou lumière UV.
• Un résultat négatif ne signifie pas nécessairement que l’hôte n’est pas infecté par le virus. Mauvaise qualité des échantillons, faible charge virale, ou la présence de substances fortement inhibitrices (comme l'alcool, désinfectants, anticoagulants, etc.) peut entraîner un échec de l’extraction des acides nucléiques (détection) et un “négatif” résultat. Suivre les critères d'interprétation des résultats, et quand il y a des résultats suspects, exclure d’abord la contamination par aérosols. S'il y a d'autres questions, contacter le personnel technique du fabricant.
• Ce produit est à usage unique. Les composants du réactif sont sensibles à la lumière naturelle; éviter l’exposition à la lumière pendant l’emballage et le stockage. Après emballage, ne pas congeler-dégeler à plusieurs reprises. Pour la recherche scientifique uniquement; pas pour le diagnostic clinique ou à d'autres fins.