Herpèsvirus du Pigeon (PiHV) Kit de test d'acide nucléique

Herpèsvirus du Pigeon (PiHV) Kit de test d'acide nucléique (RAP-Méthode de sonde fluorescente)

Numéro d'article： AP2308002 Spécification：24T/48T/96T Stockage：-20℃

Présentation du produit：

• Herpèsvirus du Pigeon (PiHV) Infection:
  • Maladie infectieuse virale affectant principalement les jeunes pigeons et causée par le type Pigeon Herpesvirus 1 (PiHV1).
  • Agent pathogène important conduisant au syndrome de la maladie du pigeonneau chez les jeunes pigeons.
  • Cliniquement caractérisé par des symptômes tels qu'une inflammation nasale et conjonctivale, dépression, diminution de l'appétit, diarrhée, vomissement, et symptômes neurologiques.
• Importance de la détection:
  • Tôt, rapide, et une détection pratique du PiHV est cruciale pour le diagnostic.
  • Aide à ralentir la propagation de la maladie et à prévenir les complications.
• Description du kit de test:
  • Conçu sur la base de séquences conservées dans le gène PiHV.
  • Des conditions optimisées permettent des tests PCR quantitatifs fluorescents précis.
  • Accepte l'oral, et prélèvements cloacaux, sang, et autres échantillons de tissus d'oiseaux.
  • Permet une détermination rapide de l’infection par PiHV chez l’hôte.

Contenu du produit：

Composants réactifs	AP2308002-01 (24T)	AP2308002-02(48T)
Solution de prémélange PiHV	11.5µL/puits× 8puits/bande× 3 bandes	11.5µL/puits× 8puits/bande× 6bandes
Solution de réaction PiHV	290µL	575µL
PiHV Contrôle positif	100µL	100µL
Contrôle négatif	100µL	100µL

Conditions de stockage：

Conserver à -20℃, la durée de conservation est d'au moins 12 mois.

Opération expérimentale：

1. La préparation des échantillons (Zone de préparation des échantillons)

1.1 Exemples d'exigences:

– Écouvillonnages oraux et cloacaux: Prenez un coton-tige stérile, insérez-le dans la gorge ou le cloaque de l’oiseau, tourner trois fois, placez-le dans un tube à centrifuger, couper la partie exposée, fermez bien le bouchon, et étiquetez-le. Les échantillons pouvant être testés rapidement doivent être conservés entre 2 et 8 °C dans les 24 heures, et les échantillons qui ne peuvent pas être testés rapidement doivent être conservés à -20 °C..

– Le sang total: Utiliser l'EDTA comme anticoagulant, éviter l'anticoagulant à base d'héparine, utiliser du sang total frais, ou conserver à 2-8°C pendant maximum 7 jours, ou conserver à -20°C pendant maximum 3 mois, éviter les cycles répétés de gel-dégel.

– Tissu: Prendre des tissus musculaires ou organiques frais ne dépassant pas 100 mg, utiliser 200 à 500 μL d'eau stérile pour préparer l'homogénat de tissus, et procéder à la préparation ultérieure des échantillons.

1.2 La préparation des échantillons:

Référez-vous au SanshiBio “Kit d'extraction rapide d'ADN génomique animal (pour analyse PCR)” manuel (Catalogue: DP202), ou d'autres kits/méthodes d'extraction d'acide nucléique qui répondent aux exigences pertinentes, pour l'extraction d'acide nucléique d'échantillons traités. Placez l'acide nucléique de l'échantillon extrait dans une glacière et testez-le dès que possible.. Conserver à 4°C maximum 7 jours ou à -20°C pendant pas plus de 6 mois.

2. Préparation du système de réaction (Zone de réaction)

2.1 Sortez chaque composant du kit, décongeler complètement à température ambiante, centrifugeuse pour 10 secondes, et centrifugez le liquide à l'intérieur de la paroi du tube et du capuchon du tube jusqu'au fond du tube. Préparer la solution réactionnelle en fonction de la quantité d'échantillon (n+2, où n est le nombre d'échantillons, il est recommandé de mettre en place 1 contrôle positif et 1 contrôle négatif pour chaque expérience). Méthode de préparation spécifique: Prendre (n+2) tubes de réaction contenant une solution de prémélange PiHV, ajouter 11,5 µL de solution de réaction PiHV dans chaque tube, utiliser une pipette pour bien mélanger, 23µL par puits, et conserver au frais.

2.2 Ajoutez ensuite séquentiellement 2 μL de contrôle négatif, échantillon d'acide nucléique extrait, et contrôle positif PiHV à la solution réactionnelle. Fermez le bouchon du tube, faire un enregistrement, et le volume total de chaque réaction est de 25μL. Bien mélanger, centrifugeuse pour 10 secondes, et effectuer des expériences d'amplification sur l'instrument PCR.

3. Amplification PCR (Domaine d'amplification et d'analyse de produits)

Pré-dénaturation à 95°C pour 2 minutes; Dénaturation à 95°C pour 10 secondes, recuit et extension à 60°C pour 35 secondes, 40 cycles. Recueillir des signaux de fluorescence à 60°C. Choisissez le canal de fluorescence FAM (utiliser des instruments de PCR quantitative à fluorescence en temps réel tels que la série ABI, si nécessaire, contacter le fabricant ou ajouter du colorant correcteur ROX; sinon, suivre les procédures normales).

4. Interprétation des résultats

4.1 Conditions de validité de l'expérimentation:

Valeur Ct du canal FAM du contrôle positif < 28 et un “S”-une courbe d'amplification en forme est observée; le contrôle négatif n’a pas de valeur Ct ou une valeur Ct ≥ 38 et non “S”-courbe d'amplification en forme, l'expérience est valide. Sinon, répéter l'expérience; si l'expérience répétée n'est toujours pas valide, contacter le personnel technique du fabricant.

4.2 Interprétation des résultats de l'échantillon:

Valeur CT ≤ 33 Et un “S”-la courbe d'amplification en forme indique un PiHV positif;

Valeur Ct entre 33 < CT < 38 est considéré comme suspect, et un nouveau test est recommandé. Si la valeur Ct du nouveau test du canal FAM est < 33 après exclusion de la contamination par aérosol et il y a une courbe d'amplification claire, il est considéré comme PiHV positif, autrement considéré comme négatif;

Aucune valeur Ct ou valeur Ct ≥ 38 et non “S”-la courbe d'amplification en forme indique un PiHV négatif.

Précautions：

• Pour éviter les contaminations, l'expérience doit être strictement cloisonnée, et l'isolement physique entre les cloisons est préférable pour éviter la contamination croisée due à des facteurs humains. Portez des blouses de laboratoire et des gants en latex pendant l'expérience, utiliser les outils de manière indépendante dans différents domaines, changer de gants et de blouses de laboratoire si nécessaire. Après PCR, n'ouvrez pas le couvercle immédiatement; ouvrez-le après un refroidissement suffisant pour minimiser la contamination par les aérosols.
• Décongeler complètement les réactifs avant utilisation, mais évitez les cycles répétés de gel-dégel. Les tubes de réaction PCR fournis dans le kit font 0,2 ml; si un remplacement est nécessaire, transfert après décongélation complète. Suivez strictement les instructions de préparation des réactifs et d’ajout d’échantillons. Postes de travail, centrifugeuses, pipettes, et les autres instruments doivent être désinfectés régulièrement avec des désinfectants contenant du chlore, alcool, agents de décontamination des acides nucléiques, ou lumière UV.
• Un résultat négatif ne signifie pas nécessairement que l’hôte n’est pas infecté par le virus. Mauvaise qualité des échantillons, faible charge virale, ou la présence de substances fortement inhibitrices (comme l'alcool, désinfectants, anticoagulants, etc.) peut entraîner un échec de l’extraction des acides nucléiques (détection) et un “négatif” résultat. Suivre les critères d'interprétation des résultats, et quand il y a des résultats suspects, exclure d’abord la contamination par aérosols. S'il y a d'autres questions, contacter le personnel technique du fabricant.
• Ce produit est à usage unique. Les composants du réactif sont sensibles à la lumière naturelle; éviter l’exposition à la lumière pendant l’emballage et le stockage. Après emballage, ne pas congeler-dégeler à plusieurs reprises. Pour la recherche scientifique uniquement; pas pour le diagnostic clinique ou à d'autres fins.