Kit d'extraction d'ADN tissulaire inclus en paraffine

1. Composants du kit de réactifs

Caractéristiques	50T	100T
Chat. Non.	SN0251	SN0252
Colonnes d'extraction d'ADN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Tampon réactif IV	20 ml	2 × 20 ml
Tampon réactif C	30 ml	2 × 30 ml
Tampon réactif FF	60 ml	2 × 60 ml
Tampon de lavage 1	15 ml	2 × 15 ml
Tampon d'élution	20 ml	20 ml
Protéinase K	1ml	2x1ml
RNASEA	1ml	2x1ml
Manuel d'instructions	1	1

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Protéinase K et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.

3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.

4. Introduction au kit de réactifs

 

Tissu à la paraffine Purification de l'ADN Le kit fournit une solution de purification d'ADN rapide et efficace pour les échantillons dans des sections de paraffine. Les tissus sont collectés après la dissolution de la paraffine à l'aide d'une solution de déwax dédiée, et l'ADN de l'échantillon est obtenu par le biais de processus d'extraction ultérieurs.

 

Ce kit peut extraire l'échantillon d'ADN à partir de sections de paraffine à l'intérieur 30 minutes, et l'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme. L'ADN extrait peut être directement utilisé pour RAP, Southern Blot, et d'autres applications.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Avant de commencer l'expérience:

UN. Tampon réactif FF:Ce tampon doit être stocké à long terme dans un environnement entre 2 ° C et 8 ° C.

B. Tampons réactifs IV et C peut précipiter dans des conditions de basse température. Il est recommandé de chauffer à 65°C pendant 5 minutes. Après dissolution du précipité, La solution peut être utilisée normalement.

C. LaverTampon 1 devrait avoir une quantité spécifiée d'éthanol anhydre ajouté avant utilisation, comme indiqué sur l'étiquette du flacon de réactif. Vérifiez l'étiquette avec une marque de tick pour indiquer l'ajout de l'éthanol anhydre.

D. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE avec une quantité minimale d'EDTA. Si l'EDTA affecte les expériences ultérieures, Il est conseillé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.

 

1. Traitement des échantillons:

Sélectionner 5-10 sections de paraffine (1MM-3 mm d'épaisseur), Utiliser des ciseaux pour éliminer l'excès de cire, et couper l'échantillon de tissus intégrés en petits morceaux. Placez-les dans un tube à centrifugeuse de 1,5 ml, ajouter 800μl de réactif tampon ff, incuber à 75 ° C pour 5 minutes jusqu'à ce que toute la paraffine soit dissoute. Centrifugeuse à 12000 tr / min pour 5 minutes, jeter le surnageant.

2. Ajouter 400μL du tampon réactif IV, 20µl de protéinase K (10 mg/ml), et 10 μl de RNASEA (10 mg/ml) au précipité de l'étape précédente. Digest à 65 ° C, remuant chaque 6-7 fois jusqu'à ce que la digestion soit terminée.
3. Ajoutez un volume égal de Tampon réactif Cet un volume égal d'éthanol anhydre, bien mélanger en pipetant.

(Par exemple: Si vous ajoutez 400 μl de réactif tampon IV, Ajouter approximativement 430 μl de réactif tampon C et 430 μl d'éthanol anhydre. Certaines précipitations peuvent se produire après l'ajout de réactif tampon C, Mais cela n'affecte pas les expériences ultérieures.)

4. Ajouter le liquide obtenu à la colonne de purification d'extraction d'ADN (ou cartouche) (environ 650-700μl à chaque fois), Laissez-le se tenir à température ambiante pour 2 minutes, centrifugeuse à plus de 8 000 tr / min pour 1 minute. Jetez les déchets collectés et réinsérez le tube de collecte dans la colonne de purification pour l'étape suivante.
5. Répétez l'étape 4, Ajout du liquide restant à la colonne de purification d'extraction d'ADN (ou cartouche), centrifugeuse à plus de 8 000 tr / min pour 1 minute, jeter les déchets et le tube de collecte.
6. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (ou cartouche) dans le tube de collection, ajouter 300µl LaverTampon 1, centrifugeuse à plus de 8 000 tr / min pour 1 minute. Jetez les déchets et réinsérez la colonne de purification dans le tube pour l'étape suivante.

(Note: Confirmer que l'éthanol anhydre a été ajouté à Laver Tampon 1.)

7. Ajouter 500µl LaverTampon 1 à la colonne de purification d'extraction d'ADN (ou cartouche), centrifugeuse à 14 000 tr / min (20000×g) pour 2 minutes. Prolonger le temps de centrifugation si nécessaire pour une membrane plus sèche.
8. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (ou cartouche) Dans un nouveau tube à centrifugeuse, ouvrir le couvercle, incuber à 65°C pendant 2 minutes. Étendre cette étape si nécessaire pour évaporer l'éthanol pour empêcher l'éthanol résiduel de affecter les expériences en aval.
9. Suspendre l'ajout de 50-100µl de tampon d'élution à la membrane, centrifuger à 12 000 tr / min pour 2 minutes.

(Note: 1. L'utilisation du tampon d'élution de 50 μl pour l'élution de l'ADN peut augmenter la concentration de l'ADN mais diminue le rendement total de l'ADN. 2. L'ADN élué peut être réappliqué à la colonne de purification d'extraction d'ADN, centrifugé à 12000 tr / min pour 2 Minutes à nouveau pour augmenter le rendement de l'ADN.)