- Composants du kit de réactifs
| Caractéristiques | 50T | 100T |
| Chat. Non. | SN0325-D | SN0326-D |
| Colonnes d'extraction d'ARN (ensemble) | 50 (ensemble) | 100 (ensemble) |
| Colonnes de nettoyage d'ADN (ensemble) | 50 (ensemble) | 100 (ensemble) |
| Tampon de lyse des globules rouges10x | 60 ml | 2×60 ml |
| Extraction d'ARN Tampon 1 plus | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampon d'élimination des inhibiteurs | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampon de lavage 1 | 15 ml | 2×15 ml |
| Tampon d'élution | 20 ml | 20 ml |
| Manuel d'instructions | 1 | 1 |
- Stockage
Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) dans un environnement sec et peut être conservé pendant 12 mois.
- Instructions d'utilisation du kit de réactifs
3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..
3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).
3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.
- Introduction au kit de réactifs
Le kit de purification d'ARN fournit une méthode rapide et efficace pour purifier l'ARN du sang et d'autres tissus fluides. Il convient à la plupart des fluides et tissus biologiques. Ce kit de purification d'ARN peut être appliqué à des échantillons de sang dépassant 0.5 ml, et grâce à la technologie d'élimination de l'ADN, l'ARN extrait est pratiquement exempt d'ADN génomique.
Le RNA Fast Purification Kit permet l’extraction de l’ARN total (y compris l'ARN nucléaire et l'ARN cytoplasmique) du sang à l'intérieur 2 heures. L'ARN purifié peut être directement utilisé pour des applications telles que la RT-RAP, Transfert du Nord, etc.. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme, ce qui rend le kit de purification d'ARN bien adapté à divers autres types d'échantillons.
- Principes et procédures expérimentaux
- Processus d'extraction
Précautions avant de commencer l'expérience:
UN. Avant utilisation, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol au tampon de lavage 1 comme indiqué sur l'étiquette du flacon de réactif, et cochez l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol.
B.Elution Buffer est une solution 0,1x TE contenant une quantité minimale d'EDTA. Si l'EDTA affecte les expériences ultérieures, il est recommandé d'utiliser de l'eau déminéralisée stérile comme substitut au tampon d'élution.
- Traitement des échantillons: Prélever 200 μL de sang dans un tube EP, ajouter 80µL de tampon de lyse des globules rouges 10x, et mélanger soigneusement en pipetant.
- Ajouter 500Tampon d'extraction d'ARN μL 1 plus, secouer vigoureusement pour mélanger, centrifuger à 12 000 tr/min pour 3 minutes.
- Transférer le surnageant dans un Purification de l'ADN colonne, centrifuger à 12 000 tr/min pour 1 minute.
- Ajouter 250µL d'éthanol au surnageant, pipeter et mélanger, transférer le liquide dans la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12 000 tr/min pour 30 secondes, jeter le surnageant.
- Ajouter 600Tampon d'élimination des inhibiteurs μL à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12 000 tr/min pour 30 secondes, jeter le surnageant.
- Ajouter 600Tampon de lavage μL 1 à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12 000 tr/min pour 30 secondes, jeter le surnageant.
(Note: Confirmez que de l'éthanol a été ajouté au tampon de lavage 1. La présence d'éthanol affecte de manière significative les expériences ultérieures. Donc, le séchage par membrane est crucial. Après centrifugation, s'assurer qu'il ne reste pas d'éthanol avant l'élution, puis jetez les déchets et le tube de collecte. Après avoir utilisé le tampon de lavage 1, la membrane de la colonne de purification d'ARN doit avoir une légère couleur. Après centrifugation, retirer délicatement la colonne de purification d'ARN, en s'assurant qu'il ne touche pas le tube de prélèvement pour éviter les interférences avec l'éthanol.)
- Répétez l'étape 6.
- Centrifuger le tube vide à 12 000 tr/min pendant 2 minutes (évaporer l'éthanol résiduel).
- Placer la colonne de purification d'ARN dans un nouveau tube à centrifuger, verser 100 μL de tampon d'élution sur la membrane, incuber à température ambiante pendant 5 minutes (15℃~25℃), centrifuger à 12 000 tr/min pour 1 minute.
(Note: L'élution de l'ARN avec 50 μL de tampon d'élution peut augmenter la concentration d'ARN mais réduire le rendement total en ARN..)
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