1. Composants du kit de réactifs
| Caractéristiques | 50T | 100T |
| Chat. Non. | SN0221 | SN0222 |
| Colonnes d'extraction d'ADN (ensemble) | 50 (ensemble) | 100 (ensemble) |
| Tampon réactif IV | 20 ml | 2×20 ml |
| Tampon réactif Cplus | 30 ml | 30 ml |
| Tampon de lavage 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampon d'élution | 20 ml | 20 ml |
| Protéinase K | 1ml | 2x1ml |
| RNASEA | 1ml | 1ml |
| Manuel d'instructions | 1 | 1 |
2. Stockage
Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Protéinase K et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.
3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs
3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..
3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.
3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.
4. Introduction au kit de réactifs
L'animal/tissu Purification de l'ADN Le kit offre une solution rapide et efficace pour la purification de l’ADN des tissus animaux et des cultures cellulaires, largement applicable dans les tissus animaux et les cultures cellulaires.
Ce kit de purification rapide de l'ADN extrait rapidement l'ADN total des animaux et des cellules, produisant un ADN directement utilisable pour RAP, Southern Blot, et applications similaires. Le processus de purification ne nécessite pas d'agents toxiques comme le phénol-chloroforme, ce qui rend ce kit de purification d'ADN parfaitement adapté à divers autres échantillons.
5. Principes et procédures expérimentaux
6. Processus d'extraction
Avant de commencer l'expérience:
UN. Tampon réactif IV a tendance à précipiter dans des conditions de basse température. Il est recommandé de chauffer à 65 ℃ pendant 5 minutes. Après dissolution des précipitations, il peut être utilisé normalement.
B. Avant usage, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre à LaverTampon 1 comme indiqué sur l'étiquette du flacon de réactif, et cochez l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol anhydre.
C. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE avec un contenu EDTA minimal. Si l'EDTA peut affecter les expériences ultérieures, il est recommandé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.
- Manipulation des échantillons:
UN. Prenez la culture cellulaire, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute pour collecter les cellules, et aspirer le surnageant autant que possible. Ajouter 250 μl de Reagent Buffer IV et 10 μl de RNaseA (10 mg/ml) aux cellules collectées, suspendre complètement, et incuber à 65°C pendant 10 minutes.
B. Broyer le tissu sans dépasser 25 mg en poudre fine en utilisant de l'azote liquide. Ajouter 200 μl de tampon réactif IV, 20μl de protéinase k (10 mg/ml), et 10μl de RNaseA (10 mg/ml) à la poudre, secouez bien, et incuber à 65°C pendant 30 minutes, secouer le mélange quatre fois pendant cette période.
2. Ajouter 200µl de tampon réactif Cplus au lysat et bien mélanger. Si un précipité blanc apparaît, il peut être laissé sans être perturbé; Cela n'affectera pas les expériences ultérieures une fois que le précipité disparaîtra.
3. Ajouter 200µl d'éthanol anhydre et mélanger soigneusement. Des précipitations pourraient survenir, Mais cela n'affectera pas les expériences ultérieures.
4. Appliquer le liquide obtenu sur la colonne de purification par extraction d'ADN (manche) (environ 650 ~ 700 μl à chaque fois), laissez-le reposer à température ambiante pendant 2 minutes, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets collectés, et réinsérez le tube de collecte dans la colonne de purification pour l'étape suivante.
5. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (manche) dans une nouvelle pochette de collection, ajouter 700µl de LaverTampon 1, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets, et placez la colonne de purification d'extraction d'ADN (manche) je retourne dans la manche pour la prochaine étape.
(Note: Confirmer l'ajout d'éthanol anhydre au tampon de rinçage 1.)
6. Ajouter 500µl de LaverTampon 1 à la colonne de purification d'extraction d'ADN (manche), centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, prolonger le temps de centrifugation de manière appropriée pour garantir que la membrane est plus sèche.
(Note: L'éthanol a un impact significatif sur les expériences ultérieures; donc, la sécheresse de la membrane est cruciale. Après centrifugation, s'assurer qu'il ne reste pas d'éthanol avant l'élution. Jetez ensuite les déchets et les tubes de collecte.. Après rinçage avec Wash Buffer 1, la membrane de la colonne de purification d'ADN doit avoir une couleur pâle. Retirez délicatement la colonne de purification d'ADN après centrifugation, en s'assurant qu'il ne touche pas le tube de prélèvement pour éviter la contamination par l'éthanol.)
7. Placer la colonne de purification d'ADN dans un nouveau tube à centrifuger, ajouter 100μl de tampon d'élution directement sur la membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, et collecter l'ADN.
(Note: L'élution de l'ADN avec 50 µl de tampon d'élution peut augmenter la concentration d'ADN mais diminue le rendement total en ADN.)
Commentaires
Il n'y a pas encore de critiques.