Stool or Soil Genomic DNA Extraction Kit

1. Componentes del kit de reactivos

2. Almacenamiento

Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) y en condiciones secas, con una vida útil de 12 meses. Las columnas de purificación y extracción de ADN se pueden almacenar durante 1 año en un ambiente fresco y seco. lisozima, Proteinasa K, y ARNasa A contienen conservantes, permitiendo el transporte a temperatura ambiente, pero para almacenamiento a largo plazo, deben mantenerse a -20 ℃.

3. Instrucciones para usar el kit de reactivos

3.1 Este kit de reactivos está destinado a la investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..

3.2 Algunos componentes del kit de reactivos contienen irritantes.. Se recomiendan medidas de protección como el uso de ropa y gafas protectoras..

3.3 Durante el uso de este kit de reactivos, una centrífuga de alta velocidad, baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, agua desionizada estéril, y los tubos EP deben ser preparados por el usuario.

4. Introducción al kit de reactivos

This kit provides a fast and efficient method for purifying microbial genomic DNA from soil, feces, and vomit samples. It is widely used for microbial DNA extraction from soil, feces, and vomit.

This kit effectively removes sample impurities and inhibitors, reducing inhibitory reactions in downstream experiments such as PCR. Todo el proceso de purificación no requiere reactivos tóxicos como el fenol-cloroformo.. The extracted DNA can be directly used for PCR, transferencia del sur, y otras aplicaciones.

5. Principios y procedimientos experimentales

6. Proceso de extracción

Antes de comenzar el experimento:

A. Reagent Buffer IV puede precipitar en condiciones de baja temperatura. Recomendamos calentar a las 65 ℃ para 5 minutos. Después del precipitado se disuelve, se puede utilizar normalmente.

B. Antes de usar, agregue la cantidad especificada de etanol anhidro a Tampón de lavado 1 Como se indica en la etiqueta de la botella. Marque una verificación de la etiqueta para indicar la adición de etanol anhidro.

C. El tampón de elución es un 0.1x solución TE que contiene cantidades mínimas de EDTA. Si el EDTA podría afectar experimentos posteriores, Es aconsejable sustituir el tampón de elución con agua desionizada estéril.

1. Procesamiento de muestras (Inhibitor Removal):

A. Fecal and Vomit Samples: Add approximately 200mg of the sample to be extracted, agregar 1ml of Humic Acid Removal Reagent I, vortex thoroughly for 1-2 minutos, centrifugar en 12,000 rpm para 2 minutos, descartar el sobrenadante, agregar 560μl of Buffer IV to the pellet, invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 minutos, invertir y mezclar 6-7 times during digestion, then proceed to step 2.

B. Soil Samples: Weigh approximately 0.1g-0.5g of sieved soil, agregar 500μl of Buffer IV and 100μl of Humic Acid Removal Reagent I, invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 minutos, invertir y mezclar 6-7 times during digestion, then proceed to step 2.

(Nota: Humic Acid Removal Reagent I/Humic Acid Removal Reagent II is mainly used for soils with high humic acid content, such as forest soils and sedimentary soils. Agregar 1ml of Humic Acid Removal Reagent I to the sample, vortex, shake for 1-2 minutos, centrifugar en 8,000 rpm para 2 minutos, descartar el sobrenadante, Luego añade 1ml of Humic Acid Removal Reagent II, vortex, centrifugar en 8,000 rpm para 2 minutos, descartar el sobrenadante. This step can further reduce soil humic acid inhibitors but significantly reduce DNA yield.)

2. Centrifugar en 12,000 rpm para 2 minutos, transfer the supernatant to a new centrifuge tube (approximately 500μl liquid transferred), add 20μl Proteinase K (10 mg/ml), 20μl Lysozyme, and 20μl RNase A, and incubate at 65℃ for 2 minutos.
3. Agregue un volumen igual de Reactivo Buffer C plus (approximately 560μl liquid transferred) al lisado, mezclar bien. Si aparece un precipitado blanco, let it settle; it won’t affect subsequent experiments after the precipitate disappears.
4. Add an equal volume of ethanol to Reactivo Buffer C plus (p.ej., agregar 560µl de Reactivo Buffer C plus, then add 560μl of ethanol), mezclar bien. There may be precipitation, pero no afectará los experimentos posteriores..
5. Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (manga) (Aproximadamente 650-700 μl cada vez), centrifugar a más 8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos recolectados, and reinsert the collection tube into the DNA extraction purification column (manga) para el siguiente paso.
6. Agregar 400μl Inhibitor Removal Buffer, centrifugar a más 8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos, and reinsert the purificación de ADN column into the sleeve for the next step.
7. Agregar 500μl Wash Buffer 1 a la columna de purificación de extracción de ADN (manga), centrifugar en 14,000 rpm (20,000×g) para 1 minuto.
8. Agregar 300μl Wash Buffer 1 again to the DNA extraction purification column (manga), centrifugar en 14,000 rpm (20,000×g) para 2 minutos.
9. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (manga) en un nuevo tubo de centrífuga, abrir la tapa, and incubate at 65℃ for 2 minutos. This step can be extended if necessary to evaporate ethanol as much as possible to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.
10. Goteo 100µl de tampón de elución sobre la membrana, centrifugar en 12,000 rpm para 2 minutos.

(Nota: 1. Eluting DNA with 50μl Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce total DNA yield; 2. El ADN eluido se puede volver a aplicar a la columna de purificación de extracción de ADN, centrifuged again at 12,000 rpm para 2 minutos, and collected to increase DNA yield.)