Kit de tinción de peroxidasa de leucocitos de esperma Solarbio(Método de n-toluidina)

Información del producto

• Código de producto: G3410
• Especificación: 20t
• Almacenamiento: Almacenar a 2-8 ° C, con una vida útil de 6 meses.

Contenido del producto:

Descripción del Producto:

La mayoría de los semen contienen glóbulos blancos, principalmente leucocitos polimorfonucleares (PMNS, neutrófilos). A veces, Los glóbulos blancos se pueden distinguir de las células de los espermatozoides y los espermatocitos en manchas de semen utilizando el método de tinción de Papanicolaou. Distinguir los glóbulos blancos depende principalmente de las diferencias en la tinción, tamaño, y morfología del núcleo. Los leucocitos polimorfonucleares son morfológicamente similares a las células de esperma multinucleado, Pero los leucocitos polimorfonucleares se tiñen de color azul claro, mientras que las células de los espermatozoides se manchan la luz roja. El tamaño del núcleo también ayuda en la diferenciación: El núcleo de los leucocitos mononucleares fluctúa ampliamente en tamaño, que varía de aproximadamente 7 μm para linfocitos a más de 15 μm para macrófagos. El número de glóbulos blancos en el semen también se puede cuantificar utilizando otras técnicas.

El principio de la tinción de peroxidasa para los glóbulos blancos seminales (Método de ortotoluidina) es que el tipo principal de glóbulos blancos en el semen son los granulocitos positivos para peroxidasa, que se puede seleccionar utilizando la tinción de peroxidasa. Este método es rápido, barato, y práctico para la detección inicial de granulocitos. Aunque esta técnica tiene la ventaja de ser relativamente fácil de operar, no puede detectar lo siguiente: ① Leucocitos polimorfonucleares que ya se han activado y liberado sus gránulos; ② Otros tipos de glóbulos blancos que no contienen peroxidasa, como linfocitos, macrófagos, y monocitos. Este producto puede usarse para diferenciar los leucocitos polimorfonucleares de las células de esperma multinucleado que no contienen peroxidasa.

Pasos operativos (solo por referencia):

1. Prepare la solución de trabajo de ortotoluidina: Agregue 1 ml de solución de cloruro de amonio saturado, 1ml de solución EDTA, y 10 μl de oxidante a 9 ml de solución de sustrato, mezclar bien, y usar dentro 24 horas de preparación.
2. Mezcla a fondo la muestra de semen, Mezcle 0.1 ml de semen con 0.9 ml de solución de trabajo.
3. Vórtice la suspensión del esperma para 10 segundos y déjelo pararse a temperatura ambiente para 20-30 minutos. Alternativamente, Use un rockero de tubo para la agitación continua.
4. Después 20-30 minutos, Mezcle la suspensión del esperma nuevamente y llene la muestra en las piscinas de conteo en ambos lados del hemocitómetro.
5. Coloque el hemocitómetro horizontalmente en una cámara húmeda a temperatura ambiente durante al menos 4 minutos para permitir que las células se asienten.
6. Usar un 200 o microscopio de contraste de fase de 400 veces para observar y contar al menos 200 células de peroxidasa positiva.

Especificaciones:

• Reactivo (A): Solución de cloruro de amonio saturado 2 ml, almacenado a 2-8 ° C.
• Reactivo (B): Solución EDTA 2ml, almacenado a 2-8 ° C.
• Reactivo (C): Solución de sustrato de ortotoluidina 20 ml, almacenar a 2-8 ° C, evitar la luz.
• Reactivo (D): Oxidante 1 ml, almacenado a 2-8 ° C.

Resultados de manchas:

Las células de peroxidasa positiva se manchan de color marrón, mientras que las células de peroxidasa negativa permanecen sin manchas.

Precauciones:

1. Prepare la solución de trabajo de ortotoluidina justo antes de su uso y no la guarde durante un período prolongado después de la preparación.
2. Si la temperatura ambiente en la sala de tinción es baja, Use una incubadora o baño de agua para completar el proceso de tinción.
3. Al examinar las piscinas de conteo, Continuar contando al menos 200 Células positivas para peroxidasa por cuadrícula hasta que se cuenten las redes completas; No dejes de contar en medio de una cuadrícula.
4. Por tu seguridad y salud, Use abrigos de laboratorio y guantes desechables durante la operación.
5. Este producto es solo para fines de investigación y no debe usarse para el diagnóstico clínico u otros fines.