triglicérido(TG) Kit de ensayo de contenido
Nota: Tome dos o tres muestras diferentes para predecir antes de la prueba..
Equipo de operación: Microplate reader/Spectrophotometer
Numero de catalogo: BC0625
Tamaño:100T/96S
Componentes:
reactivo yo: Self-provided reagent, agregar 80 mL of n-heptane and 80 mL of isopropyl alcohol to an empty glass bottle. Seal and mix well, Almacenamiento a 4 ℃.
Reactivo II: 3 mL×1 bottle. Almacenamiento a 4 ℃.
Reactivo III: 10 mL×1 bottle. Almacenamiento a 4 ℃.
Reactivo IV: 3 mL×1 bottle. Almacenamiento a 4 ℃, protegido de la luz. Reactivo V: 10 mL×1 bottle. Almacenamiento a 4 ℃, protegido de la luz. Reactivo VI: 10 mL×1 bottle. Almacenamiento a 4 ℃, protegido de la luz.
Estándar: powder ×1 bottle, agregar 5 ml de reactivo I antes de usar. 1 mg/mL triglyceride standard solution, Almacenamiento a 4 ℃.
Descripción del Producto:
triglicérido(TG) is a fat molecule formed by long-chain fatty acids and glycerol, which is not only the main component of cell membrane, but also an important respiratory substrate. The TG is extracted with isopropyl alcohol, then hydrolysis to glycerol and fatty acids after saponification of TG by KOH. Glycerol is oxidized by periodic acid to form formaldehyde. Condensation of formaldehyde and acetylacetone to form yellow components in presence of chloride ions. The yellow component has a characteristic absorption at 420 nm and proportional to the TG content.
Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados:
Espectrofotómetro/lector de microplacas, cubeta de microvidrio/placa de fondo plano de 96 pocillos, n-heptane, isopropyl alcohol, baño de agua, pipeta ajustable, distilled water and 125 mL of empty bottle.
Procedimiento:
I. preparación de la muestra:
- Tejido:
La homogeneidad de la beca de hielo se realiza de acuerdo con la proporción de masa tisular (gramo): Reagent Ⅰ volume (mililitros) = 1: 5~10 (Se sugiere que se tome 0.1 g de tejido y agregar 1 mL de Reactivo I). Centrifugar en 8000 g for 10 minutos a las 4 ℃, supernatant is used for test.
- Bacterias:
Recolectar 5 million cells or bacteria into the centrifuge tube, then discard the supernatant, final add 1 mL de Reactivo I. Splitting bacteria or cell with ultrasonic for 1 minuto (fuerza 20%, work time 2s, interval 1s). Centrifugar en 8000 g for 10 minutos a las 4 ℃, supernatant is used for test.
- Suero: Detectar
II. Procedimiento:
- Preheat Spectrophotometer for 30 minutos, ajustar la longitud de onda a 420 Nuevo Méjico, poner a cero con agua destilada.
- Preheat water bath to 65℃.
| Nombre del reactivo (µL) | tubo en blanco (AB) | tubo estándar( COMO) | Tubo de ensayo(EN) |
| Agua destilada | 40 | – | – |
| Solucion estandar | – | 40 | – |
| TG test solution | – | – | 40 |
| Reactivo ⅰ | 125 | 125 | 125 |
| Reactivo ⅱ | 25 | 25 | 25 |
| Mix thoroughly after adding Reagent I, add Reagent II, shake strongly for 30 s, stand several minutes. After layering, 15 μL of the upper layer solution is taken and put it into a new EP tube. | |||
- Detect TG content:
| Nombre del reactivo (µL) | tubo en blanco (AB) | tubo estándar (COMO) | Tubo de ensayo (EN) |
| Upper layer solution | 15 | 15 | 15 |
| Reactivo Ⅲ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| Reactivo ⅳ (uL) | 15 | 15 | 15 |
| Mezclar bien, water bath at 65℃ for 3 minutos. | |||
| Reagent Ⅴ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| Reagent Ⅵ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| Mezclar bien, water bath at 65℃ for 3 minutos. | |||
Después de enfriar, transfer liquid from the EP tube to a micro glass cuvette/96 well flat-bottom plate, and determine the absorbance at 420 Nuevo Méjico.
Nota: Blank tube and standard tube only need to be measured once.
III. Cálculo:
1) Suero:
TG(mg/dL)= C×(EN- AB)÷(COMO- AB)×100 =(EN- AB)÷(COMO- AB)×100
2) Tejido:
Concentración de proteínas:
TG(mg/mg prot)= C×V×(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷(Cpr×V)=(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷Cpr
Peso de la muestra:
TG(mg/g) = C×V×(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷W=(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷W
3 ) Bacteria or células:
TG(celda U/104) = C×(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷D=(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷D 1dL =100 mL;
V: The volume of reagent1, 1 mililitros;
C: Standard concentration, 1 mg/ mL;
RCP: Concentración de proteína de muestra (mg/mL); W.: Peso de la muestra(gramo);
D: Density of bacteria or cell, 104 cell/mL.
Nota:
- There are volatile substances in the kit. Gloves and masks should be worn during the experiment. The reagent bottle cap should be closed in time after
- After the addition of Reagent Ⅱ, it is necessary to repeatedly and violently vibrate, so that the triglyceride in the test solution can be fully extracted, and the oscillation amplitude, time, repeated times and waiting for stratification time should be
- In order to ensure the repeatability of the test, the cooling time after each water bath should be
- If the OD value of the test tube is greater than 1.5, it is recommended to dilute the sample with Reagent I properly before testing, and multiply it by the corresponding dilution multiple during calculation.
Referencias
- Fletcher M J. A colorimetric method for estimating serum triglycerides[j]. Clínica de Acta Chemical, 1968, 22(3): 393-397.
- Hercules D M, Sheehan T L. Chemiluminescent determination of serum glycerol and triglycerides[j]. Analytical chemistry, 1978, 50(1):22-25.
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Especificaciones técnicas:
El límite de detección: 0.0372 mg/mL
Linear range: 0.0625-3 mg/mL
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