triglicérido(TG) Kit de ensayo de contenido
Nota: Tome dos o tres muestras diferentes para predecir antes de la prueba..
Equipo de operación: Lector de microplacas/Espectrofotómetro
Numero de catalogo: BC0625
Tamaño:100T/96S
Componentes:
reactivo yo: Reactivo autoproporcionado, agregar 80 mL de n-heptano y 80 mL de alcohol isopropílico a una botella de vidrio vacía. Sellar y mezclar bien, Almacenamiento a 4 ℃.
Reactivo II: 3 ml×1 botella. Almacenamiento a 4 ℃.
Reactivo III: 10 ml×1 botella. Almacenamiento a 4 ℃.
Reactivo IV: 3 ml×1 botella. Almacenamiento a 4 ℃, protegido de la luz. Reactivo V: 10 ml×1 botella. Almacenamiento a 4 ℃, protegido de la luz. Reactivo VI: 10 ml×1 botella. Almacenamiento a 4 ℃, protegido de la luz.
Estándar: polvo × 1 botella, agregar 5 ml de reactivo I antes de usar. 1 Solución estándar de triglicéridos mg/mL, Almacenamiento a 4 ℃.
Descripción del Producto:
triglicérido(TG) Es una molécula de grasa formada por ácidos grasos de cadena larga y glicerol., que no es sólo el componente principal de la membrana celular, sino también un importante sustrato respiratorio. Los TG se extraen con alcohol isopropílico., luego hidrólisis a glicerol y ácidos grasos después de la saponificación de TG por KOH. El ácido periódico oxida el glicerol para formar formaldehído.. Condensación de formaldehído y acetilacetona para formar componentes amarillos en presencia de iones cloruro.. El componente amarillo tiene una absorción característica en 420 nm y proporcional al contenido de TG.
Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados:
Espectrofotómetro/lector de microplacas, cubeta de microvidrio/placa de fondo plano de 96 pocillos, n-heptano, alcohol isopropílico, baño de agua, pipeta ajustable, agua destilada y 125 mL de botella vacía.
Procedimiento:
I. preparación de la muestra:
- Tejido:
La homogeneidad de la beca de hielo se realiza de acuerdo con la proporción de masa tisular (gramo): Reactivo Ⅰ volumen (mililitros) = 1: 5~10 (Se sugiere que se tome 0.1 g de tejido y agregar 1 mL de Reactivo I). Centrifugar en 8000 g para 10 minutos a las 4 ℃, el sobrenadante se utiliza para la prueba.
- Bacterias:
Recolectar 5 millones de células o bacterias en el tubo de centrífuga, luego descartar el sobrenadante, adición final 1 mL de Reactivo I. División de bacterias o células con ultrasonido para 1 minuto (fuerza 20%, tiempo de trabajo 2s, intervalo 1s). Centrifugar en 8000 g para 10 minutos a las 4 ℃, el sobrenadante se utiliza para la prueba.
- Suero: Detectar
II. Procedimiento:
- Precalentar el espectrofotómetro para 30 minutos, ajustar la longitud de onda a 420 Nuevo Méjico, poner a cero con agua destilada.
- Precalentar el baño de agua a 65 ℃.
| Nombre del reactivo (µL) | tubo en blanco (AB) | tubo estándar( COMO) | Tubo de ensayo(EN) |
| Agua destilada | 40 | – | – |
| Solucion estandar | – | 40 | – |
| Solución de prueba TG | – | – | 40 |
| Reactivo ⅰ | 125 | 125 | 125 |
| Reactivo ⅱ | 25 | 25 | 25 |
| Mezclar bien después de agregar el Reactivo I, añadir reactivo II, agitar fuertemente para 30 s, permanecer de pie varios minutos. Después de las capas, 15 Se toma un µL de la solución de la capa superior y se coloca en un tubo EP nuevo.. | |||
- Detectar contenido TG:
| Nombre del reactivo (µL) | tubo en blanco (AB) | tubo estándar (COMO) | Tubo de ensayo (EN) |
| Solución de capa superior | 15 | 15 | 15 |
| Reactivo Ⅲ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| Reactivo ⅳ (uL) | 15 | 15 | 15 |
| Mezclar bien, baño de agua a 65 ℃ durante 3 minutos. | |||
| Reactivo Ⅴ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| Reactivo Ⅵ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| Mezclar bien, baño de agua a 65 ℃ durante 3 minutos. | |||
Después de enfriar, transfiera el líquido del tubo EP a una microcubeta de vidrio/placa de fondo plano de 96 pocillos, y determinar la absorbancia en 420 Nuevo Méjico.
Nota: El tubo en blanco y el tubo estándar solo necesitan medirse una vez.
III. Cálculo:
1) Suero:
TG(mg/dL)=C×(EN- AB)÷(COMO- AB)×100 =(EN- AB)÷(COMO- AB)×100
2) Tejido:
Concentración de proteínas:
TG(mg/mg prot)= C×V×(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷(RCP×V)=(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷Cpr
Peso de la muestra:
TG(mg/g) = C×V×(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷W=(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷W
3 ) bacterias o células:
TG(celda U/104) =C×(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷D=(EN- AB)÷(COMO- AB) ÷D 1dL =100ml;
V: El volumen de reactivo1, 1 mililitros;
C: Concentración estándar, 1 mg/mL;
RCP: Concentración de proteína de muestra (mg/mL); W.: Peso de la muestra(gramo);
D: Densidad de bacterias o células., 104 células/mL.
Nota:
- Hay sustancias volátiles en el kit.. Se deben usar guantes y máscaras durante el experimento.. La tapa de la botella de reactivo debe cerrarse a tiempo después de
- Después de la adición del Reactivo Ⅱ, es necesario vibrar repetida y violentamente, para que los triglicéridos de la solución de prueba se puedan extraer por completo, y la amplitud de oscilación, tiempo, repetidas veces y esperar el tiempo de estratificación debe ser
- Para garantizar la repetibilidad de la prueba., El tiempo de enfriamiento después de cada baño de agua debe ser
- Si el valor OD del tubo de ensayo es mayor que 1.5, Se recomienda diluir la muestra con el Reactivo I adecuadamente antes de realizar la prueba., y multiplíquelo por el múltiplo de dilución correspondiente durante el cálculo.
Referencias
- Fletcher J.J.. Un método colorimétrico para estimar los triglicéridos séricos.[j]. Clínica de Acta Chemical, 1968, 22(3): 393-397.
- Hércules D M, Sheehan TL. Determinación quimioluminiscente de glicerol y triglicéridos séricos.[j]. química analítica, 1978, 50(1):22-25.
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Especificaciones técnicas:
El límite de detección: 0.0372 mg/mL
rango lineal: 0.0625-3 mg/mL
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