Solarbio Capacidad antioxidante total (T-AOC) Kit de ensayo

Capacidad antioxidante total (T-AOC) Kit de ensayo

Nota: Tome dos o tres muestras diferentes para predecir antes de la prueba..

Equipo de operación: espectrofotómetro

No gato: antes de Cristo1310

Tamaño：50T/48S

Componentes:

Extraer solución: Líquido 50 mL×1. Almacenamiento a 4 ℃, preenfriar antes de usar.

reactivo yo: Líquido 35 mL×1. Almacenamiento a 4 ℃.

Reactivo II: Líquido 20 mL×1. Almacenamiento a 4 ℃ en la sombra.

Reactivo III: Líquido 5 mL×1. Almacenamiento a 4 ℃ en la sombra.

Estándar: Polvo × 1, 10 mg de FeSO4·7H2O. Solución de trabajo: agregar 0.9 mL de agua destilada y 20μL de ácido sulfúrico concentrado (H2SO4) a las formas 40 solución estándar de FeSO4 µmol/mL. Mezcla de solución (preparar cuando se utilizará la solución): reactivo yo : Reactivo II: Reactivo III= 7:1:1, incubar a 37 ℃ antes de usar.

Descripción del Producto:

Este kit se utiliza para detectar los niveles de antioxidantes totales de antioxidantes y enzimas antioxidantes en las muestras.. Se utiliza principalmente en el estudio de la biología., Estudios médicos y farmacéuticos para detectar la capacidad antioxidante total de las soluciones antioxidantes..

En ambiente ácido, Fe3+ -TPTZ se reducen a Fe2+ -TPTZ azul. La reacción de color refleja la capacidad antioxidante total..

Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados:

espectrofotómetro, baño maría a temperatura constante, centrífuga de baja temperatura, 1 Cubeta de vidrio de ml y agua destilada..

Procedimiento:

I. preparación de la muestra:

1. Suero, plasma, saliva, o muestras de orina

Plasma (anticoagulación con heparina o citrato de sodio, Evite el uso de EDTA), centrifugar en 5000 rpm/min para 10 mín., tomar sobrenadante para la prueba. tomar suero, muestras de saliva u orina para determinación directa. También, Puede almacenar a -80 ℃ y detectar dentro 30 días.

2. Células o tejido muestra

Llevar 1-2 millones de células o 0.1 g de tejido, agregar 1.0 mL de solución de extracto. Utilice homogeneizado o ultrasonido para descomponer completamente las células y liberar antioxidantes., centrifugar en 10000 r/min y 4 ℃ para 5 mín., tomar sobrenadante para la prueba. Mida la concentración de proteínas si es necesario..

II. Procedimiento de determinación:

1. Diluido 40 μmol/mL de solución estándar de FeSO4 a 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.00625, 0.003125 µmol/mL, llevar 500 μL de solución estándar (agua destilada para control en blanco), añadir 500 µL de Reactivo II. Mezclar bien para 10 mín., detectar la absorbancia en 593 Nuevo Méjico, calcular ΔA=AS-AB. (COMO: tubo de solución estándar, AB: tubo de control en blanco.) La concentración final de Fe2+ es 0.05、0.025、0.0125、0.00625、

0.003125、0.00156 µmol/mL.

2. Precalentar el espectrofotómetro 30 mín., ajustar la longitud de onda a 593 nm y poner a cero con destilado
3. Agregue reactivos con la siguiente lista:

Nombre del reactivo	tubo en blanco (AB)	Tubo de ensayo (EN)
Mezcla de solución (µL)	900	900
Muestra (µL)		30
agua bidestilada (µL)	120	90
Mezclar bien y reaccionar durante 10 mín., poner a cero con agua destilada, detectar la absorbancia en 593 Nuevo Méjico. Calcular ΔA’=AT – AB. (Nota: El tubo en blanco sólo necesita ser probado una o dos veces en cada experimento.)

III. Cálculo:

1. Crear curva estándar

Tome la concentración final de Fe2+ como eje X, △A como eje Y, crear curva estándar, obtener la ecuación de regresión lineal y=kx+ b, tomar ΔA’ en la ecuación para obtener x (µmol/mL).

2. Definición de unidad: La capacidad antioxidante de la muestra está indicada por la concentración de iones líquidos estándar requerida para el mismo cambio de absorbancia.(ΔA).

A. Proteína concentración:

Capacidad antioxidante total (μmol/mg de protección) = x × Vrv÷ (Vs×Cpr) = 34× x ÷ Cpr

B. Muestra peso

Capacidad antioxidante total (µmol/g de peso) = x × Vrv÷ (Vs ÷ Vsv × W) =34× x÷ W

C. Celúla cantidad

Capacidad antioxidante total (µmol/104célula) = x × Vrv÷ (Vs ×Vsv÷n) = 34× x÷ n

D. Solución volumen

Capacidad antioxidante total (µmol/mL) =x× Vrv÷ Vs =34×x

Soga: volumen total de reacción, 1.02 mililitros; contra: volumen de la muestra, 0.03 mililitros;

vsv: volumen de extracción, 1 mililitros; W.: peso de la muestra, gramo;

RCP: concentración de proteína de la muestra, mg/mL;

norte: cantidad de celdas, unidad basada en 104 (diez mil).

Nota:

1. El reactivo II irrita el cuerpo humano., por favor use ropa de laboratorio y látex
2. Las muestras no deben aparecer azules en condiciones ácidas., o interferirá con el resultado de la muestra del
3. Detergente como Tween, Tritón, NP-40 y reductores como la TDT, No se debe añadir mercapto etanol en el
4. Si el valor de absorbancia determinado por la muestra está más allá del rango de la curva estándar, La muestra debe diluirse o concentrarse adecuadamente antes de
5. El kit debe almacenarse a 2-8 ℃.

Ejemplos:

1. Agregue 0,1 g de trébol a 1 ml de solución de extracto y muela bien sobre hielo., tomar sobrenadante, seguir el procedimiento de determinación para operar, con placas de fondo plano de 96 pocillos para calcular: ΔA=A(t)-A(B)=0,909-0,148=0,761, curva estándar: y=21.056x-0.0087, calcular x=0.037, según la masa de la muestra para calcular la capacidad antioxidante total (μmol/g de masa) =34×x÷W=34×0,037÷0,1=12,85 μmol/g de masa.

Referencias：

[1] Pellegrini N., Serafini M., salvatore, et al. Capacidad antioxidante total de las especias., frutas secas, nueces,

pulsos, cereales, y dulces consumidos en Italia evaluados mediante tres ensayos in vitro diferentes[j]. nutrición molecular & investigación alimentaria, 2006, 50(11): 1030-1038.

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