Solarbio Fosfatasa Alcalina en Tejidos y Sangre (AKP/ALP) Kit de ensayo de actividad

Fosfatasa alcalina tisular y sanguínea (AKP/ALP) Kit de ensayo de actividad

Nota: Tome dos o tres muestras diferentes para predecir antes de la prueba..

Equipo de operación: espectrofotómetro

Numero de catalogo: antes de Cristo2140

Tamaño: 50T/24S

Componentes:

reactivo de extracción: Líquido 30 ml×1 botella, Almacenamiento a 4 ℃.

Reactivo 1: Líquido 10 ml×1 botella, almacenar a 4 ℃ y proteger de la luz.

Reactivo 2: Líquido 10 ml×1 botella, almacenar a 4 ℃ y proteger de la luz.

Reactivo 3: Líquido 30 ml×1 botella, almacenar a 4 ℃ y proteger de la luz. No se puede utilizar si se vuelve azul verdoso..

Estándar: Líquido 1 ml×1 botella, 10 Solución estándar de fenol μmol/mL, Almacenamiento a 4 ℃. Diluir con agua destilada para 2.5 μmol/mL antes de su uso.

Descripción del Producto:

AKP/ALP es una glicoproteasa que contiene zinc, que hidrólisis varios compuestos de monoéster de fosfolípidos naturales y sintéticos en condiciones alcalinas. AKP / Las ALP están ampliamente distribuidas en los órganos humanos., principalmente en el hígado.

En condiciones alcalinas, AKP/ALP cataliza la hidrólisis del fenilfosfato disódico a fenol, y el fenol reacciona con 4-aminoantipirina y ferricianuro de potasio para formar un derivado de quinona roja, que se puede detectar absorbancia en 510 Nuevo Méjico. La actividad de AKP/ALP se puede calcular midiendo la tasa de aumento de absorbancia en 510 Nuevo Méjico.

Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados:

espectrofotómetro, centrífuga de escritorio, transferidor, 1 cubeta de vidrio de ml, hielo y agua destilada.

Procedimiento:

I. Enzima preparación:

Agregar 1 mL Reactivo de extracción para 0.1 g tejido, moler bien. Centrifugar a 4 ℃, 10000 rpm para 10 minutos. Tome el sobrenadante en hielo para realizar la prueba.. La muestra de sangre se puede detectar directamente.. Diluir con reactivo de extracción si el concentrado es alto..

II. Determinación procedimiento:

1. Precalentar el espectrofotómetro para 30 minutos, ajustar la longitud de onda a 510 Nuevo Méjico, poner el contador a cero con destilado
2. Añadir reactivos en 1.5 cubeta de ml como se muestra a continuación:

Nombre del reactivo (µL)	prueba de tubo a3	Tubo de control A4	Tubo ciego A2	Tubo estándar A1
Agua destilada			20
Solucion estandar				20
Flotante	20
Reactivo 1	200	200	200	200
Reactivo 2	200	200	200	200
Mezclar bien, permanecer en 37 ℃ durante 15 minutos.
Reactivo 3	600	600	600	600
Flotante		20
Mezclar bien, detectar absorbancia en 510 Nuevo Méjico, registrar como A1, A2, A3, A4.

III. Cálculo de actividad AKP/ALP:

• Concentración de proteínas:

Definición de unidad: Una unidad de actividad enzimática se define como la cantidad de enzimas que cataliza la generación de 1 μmol de fenol en el sistema de reacción por minuto a 37 ℃ cada mg de proteína.

AKP/ALP (Prot. U/mg) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷(RCP×Vs)÷T=0,167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷Cpr

• Peso de la muestra:

Definición de unidad: Una unidad de actividad enzimática se define como la cantidad de enzimas que cataliza la generación de 1 μmol de fenol en el sistema de reacción por minuto a 37 ℃ cada g de muestra.

AKP/ALP (Peso U/g) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷(W÷Ve×Vs)÷T=0,167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷W

• Sangre:

Definición de unidad: Una unidad de actividad enzimática se define como la cantidad de enzimas que cataliza la generación de 1 μmol de fenol en el sistema de reacción por minuto a 37 ℃ cada ml de suero.

AKP/ALP (unidades/mL) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷Vs÷T=0,167×(A3-A4)÷(A1-A2)

C: Concentración estándar, 2.5 µmol/mL;

Soga: Volumen total de reacción, 1020 µL=1,02 ml; contra: Volumen sobrenadante, 0.02 mililitros;

ve: Volumen de extracción, 1 mililitros; W.: Peso de la muestra, gramo;

t: Tiempo de reacción, 15 minutos;

RCP: Concentración de proteína de muestra, mg/mL.

Nota:

1. Reactivo 1, Reactivo 2 y reactivo 3 debe ser protegido de
2. Reactivo 3 no se puede utilizar si ha cambiado a azul-verde.
3. Mezcle bien rápidamente después de agregar el reactivo. 3 para evitar incompletos

Ejemplo experimental:

1. Tomar 0,1 g de páncreas de ratón y añadir 1 mL de Solución de extracto para homogeneizado. Después de tomar el sobrenadante, operar de acuerdo con los pasos de determinación. Calcular AT = 0.324, AC = 0.037, AB = 0.022, COMO = 0.677. Calcular la actividad enzimática según la masa de la muestra.: Actividad de la enzima AKP/ALP (masa U/g) = 0,167×(AT-AC)÷(AS-AB) ÷W =0,167×(0.324-0.037)÷(0.677-0.022)÷0,1=0,732 U/g
2. Después de tomar el suero de conejo, La operación se lleva a cabo de acuerdo con los pasos de determinación, y la actividad enzimática se calcula de la siguiente manera: EN = 0.190, AC = 0.015, AB = 0.022, COMO = 0.677. Según el volumen de sangre., La actividad enzimática se calcula de la siguiente manera: Actividad de la enzima AKP/ALP (unidades/mL) = 0,167×(AT-AC) ÷ (AS-AB) =0,167×(0.190-0.015)÷(0.677-0.022)=0,0446U/mL.

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