Kit de ensayo de contenido de almidón Solarbio

Kit de ensayo de contenido de almidón

Nota: Tome dos o tres muestras diferentes para predecir antes de la prueba.. Equipo de operación: Espectrofotómetro/lector de microplacas.

No gato: BC0705

Tamaño: 100T/96S

Componentes:

reactivo yo: 110 mL×1. Almacenamiento a 4 ℃.

Reactivo II: 110 mL×1. Almacenamiento a 4 ℃.

Reactivo III: Polvo×2. Almacenamiento a 4 ℃.

Estándar: Polvo × 1, 10 mg de glucosa (anhidro). Almacenamiento a 4 ℃.

Solucion estandar: disuelto con 1 mL de agua destilada para 10 Solución estándar de glucosa mg/mL cuando se utilizará la solución estándar. Se puede almacenar por 2 semanas a 4 ℃.

Solución de trabajo: Agregar 2.625 mL de agua destilada al Reactivo III, agregue lentamente 14.875 mL de H2SO4 concentrado, revuelva constantemente y disuelva completamente antes de usar. Se puede almacenar por 1 semana a 4 ℃.

Descripción del Producto:

El almidón es la principal forma de almacenamiento de azúcar en las plantas.. La determinación del contenido de almidón tiene gran importancia en la evaluación del valor nutricional de los alimentos y en la investigación del metabolismo del azúcar en las plantas..

Separar el azúcar soluble del almidón mediante 80% etanol, Luego descompone el almidón en glucosa mediante hidrólisis ácida.. El contenido de almidón se puede calcular midiendo el contenido de glucosa utilizando un método colorimétrico de antrona..

Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados:

Espectrofotómetro/lector de microplacas, baño de agua, pipeta ajustable, cubeta de microvidrio/placa de fondo plano de 96 pocillos, mortero/homogeneizador, hielo, H2SO4 concentrado y agua destilada..

Procedimiento:

I. preparación de la muestra:

1. 1. Llevar 5 mg de muestra, moler en mortero y agregar 1 mL de Reactivo I. Después de la homogeneización, transferir a un tubo de centrífuga, colocar en un baño de agua a 80 ℃ durante 30 minutos, luego centrifugar a temperatura ambiente y 3000 ×g para 5 minutos, descartar el sobrenadante, retener la precipitación.
   2. Agregar 0.5 mL de agua destilada al precipitado.. Colocar en baño maría hirviendo durante 15 minutos (Apriete la tapa para evitar la pérdida de agua.)
   3. Después de enfriar, agregar 1 mL de Reactivo II, colocar en baño maría hirviendo durante 15 min., agitar 3~5 veces
   4. Después de enfriar, centrifugar a temperatura ambiente y 3000 ×g para 15 minutos, tomar el sobrenadante para la prueba.

II. Determinación procedimiento:

1. Precaliente el espectrofotómetro/lector de microplacas durante 30 minutos, ajustar la longitud de onda a 620 Nuevo Méjico, poner a cero con agua destilada.
2. Ajustar el baño María a 95°C..
3. Solución de trabajo estándar: diluir el 10 solución estándar de mg/mL con agua destilada para 0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01 mg/mL.
4. Prueba estándar: Llevar 50 μL de Solución estándar o 50 µL de agua destilada (tubo en blanco) y 250 μL de solución de trabajo para tubo EP. Colocar en un baño de agua a 95 ℃ durante 10 minutos (Apriete la tapa para evitar la pérdida de agua.), frío natural a temperatura ambiente, llevar 200 μL a cubeta de microvidrio/placa de fondo plano de 96 pocillos, determinar la absorbancia de la Solución estándar(COMO) y control en blanco(AB) en 620 Nuevo Méjico. Calcular ΔA=AS — AB. El tubo en blanco y la curva estándar solo necesitan probarse una o dos veces.
5. Prueba de muestra: Llevar 50 µL de muestra y 250 μL de solución de trabajo para EP Colocar en un baño de agua a 95 ℃ durante 10 minutos (Apriete la tapa para evitar la pérdida de agua.), enfriar naturalmente a temperatura ambiente, llevar 200 μL a cubeta de microvidrio/placa de fondo plano de 96 pocillos, determinar la absorbancia del tubo de ensayo(EN) en 620 Nuevo Méjico. Calcular ΔAˊ= AT — AB.

III. Cálculos:

1. Crear curva estándar

Tome la solución estándar de glucosa. (0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01 mg/mL) como eje x, ΔA como eje y, para dibujar la curva estándar y obtener la ecuación de regresión lineal y=kx+b, sustituyendo ΔAˊ en la ecuación se obtiene x(mg/mL).

2. Cálculo del contenido de almidón Calculado por la masa de la muestra Contenido de almidón (mg/g de masa) = x×F×VE÷W÷1.11=1.351x÷W×F VE: volumen después de la extracción, 1.5 mililitros;

W.: masa de muestra, gramo;

F: relación de dilución;

1.11: es la constante de conversión del contenido de glucosa medido por este método en contenido de almidón, eso es, 111

μg de glucosa se colorea con reactivo de antrona, que es equivalente a 100 μg de almidón por reactivo de antrona.

Nota:

1. Como el fluido de trabajo es altamente corrosivo, por favor opere con
2. Si el valor de absorbancia excede el rango lineal, El tamaño de la muestra se puede aumentar o diluir antes de la determinación..

Ejemplo experimental:

1. Tome 0,05 g de maíz para el tratamiento de muestra., tomar el sobrenadante, y luego operar de acuerdo con los pasos de determinación. Usar 96 placa de pocillos para medir y calcular ΔA′=AT-AB= 0.728-0.622 =0,195, curva estándar y = 3.1829x + 0.002, calcular x = 195. contenido de almidón (mg/g de masa) = 1.351x×F÷W= 1.351×0.195 × 128÷0.05 = 674.4 mg/g de masa.

Referencias

• Clegg KM. La aplicación del reactivo antrona a la estimación de almidón en cereales.[j]. Revista de ciencia de la alimentación y la agricultura, 1956, 7(1):40-44.
• Viles Jr., Silverman L.. Determinación de almidón y celulosa con antrona. [j]. Química analítica, 1949, 21(8):950-953.

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