Kit de extracción de ADN genómico del suelo Solarbio

Contenido del kit

Nota: Una vez abierto, Solución A, B, C, D debe mantenerse a 2-8 ℃. El potenciador de PCR debe mantenerse a -20 ℃.

Descripción del Producto

• Idoneidad y eficacia:
  • Suelo Extracción de ADN genómico El kit es ideal para extraer ADN microbiano de entornos de suelo extremos como el suelo canela., lodo, ceniza volcánica, etc..
  • Lisa eficazmente bacterias y hongos., Preservar la diversidad del ADN microbiano..
• Eliminación de humus:
  • Utiliza material exclusivo de adsorción de humus para eliminar de manera eficiente y específica varios componentes del humus..
  • Este proceso no compromete el rendimiento., y la pureza es significativamente mayor en comparación con el método de extracción con fenol-cloroformo.
• Rendimiento e integridad del ADN:
  • Los rendimientos de ADN extraído son sustanciales, y la integridad está bien mantenida.
  • El ADN extraído es adecuado para diversas operaciones de rutina., incluyendo la digestión enzimática, PCR, construcción de biblioteca, Mancha sureña, etc..

Protocolo

Agregue etanol absoluto recién abierto en el tampón de lavado antes de su uso., El volumen se basa en la etiqueta de la botella como referencia.. Vuelva a tapar la botella y agite bien.. Todos los pasos de la centrífuga se realizan a temperatura ambiente. (15℃ -25 ℃).

1. Método A: Pesar la muestra de suelo 0,1-0,5 g., agregar tierra al mortero, vierta la cantidad adecuada de nitrógeno líquido, moler inmediatamente, y repetir tres veces. Cuando la tierra se convierte en polvo, agregue 450 ul de solución A, y siga agitando durante 1-2 minutos hasta que el soluto esté completamente suspendido.

Método B: Pesar una muestra de suelo de 0,1 a 0,5 g en un tubo de centrífuga. (es mejor usar 2ml de fondo redondo), agregue 450 ul de solución A, y siga agitando durante 1-2 minutos hasta que el soluto esté completamente suspendido. Nota: El efecto de moler con nitrógeno líquido será mejor..

2. Añadir 50 ul de solución B, e invertir el tubo varias veces para mezclar completamente (no sacudas violentamente). Incubar en un baño de agua a 65 ℃ durante 6 mín., invertir, y mezclar cada uno 2 mín..
3. Agregue 100 ul de solución C, e invertir el tubo varias veces para mezclar completamente (no sacudas violentamente). Centrifugar en, 12000rpm para 10 mín..
4. Transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de centrífuga., centrifugar en, 12000rpm para 10 mín..
5. Agregue 200 ul de solución D a la columna de adsorción., añadir el sobrenadante centrifugado del paso 4 a la columna de adsorción, mezclado completamente con pipeta. Centrifugar a 12000 rpm para 1 mín..
6. Mezcle completamente el filtrado en el tubo de recolección., agréguelo a la columna de adsorción, y centrifugar a 12000rpm durante 1 mín..
7. Retire el líquido residual en el tubo de recolección., agregue 500 ul de tampón de lavado en la columna de adsorción, y centrifugar a 12000rpm durante 10 mín..
8. Repita el paso 7 dos veces (lavar tres veces en total).
9. Retire el líquido residual en el tubo de recolección., Vuelva a colocar la columna de adsorción en el tubo de recolección., y centrifugar a 12000rpm durante 2 mín..
10. Secar la columna de adsorción a temperatura ambiente.(15℃ -25 ℃) durante unos minutos o a 50 ℃ durante 1 minuto.
11. Coloque la columna de adsorción en un tubo de centrífuga nuevo., agregue 50-100 ul de tampón de lavado (precalentar a 65 ℃ antes de usar), y centrifugar a 12000rpm durante 1 mín..
12. Agregue el filtrado en el tubo de centrífuga a la columna de adsorción., centrifugar a 12000rpm para 1 mín.. El líquido del tubo de centrífuga es una solución de extracción de ADN genómico del suelo..
13. Si el efecto PCR del ADN no es bueno, Diluir adecuadamente la concentración de ADN o añadir 1/10 volumen de potenciador de PCR.

Notas

1. Las muestras de suelo fresco obtendrán un mayor rendimiento.. Y es mejor hacer referencia a las condiciones de conservación adecuadas para diferentes muestras..
2. Si la solución muestra precipitación., Redisolver en baño de agua a 37 ℃ por un momento., la precipitación desaparecerá, y no afecta la extracción de ADN.
3. Al tomar sobrenadante, se debe evitar tomar precipitaciones, de lo contrario, bloqueará la columna de absorción y afectará la pureza del producto.
4. El volumen del tampón de elución no debe ser inferior a 50 ul., si el volumen es demasiado pequeño, afectará la recuperación. Se sugiere utilizar el tampón de elución proporcionado con el kit., El uso de agua como tampón de elución perderá una parte del ADN.. El ADN extraído debe almacenarse a -20 ℃ y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación para evitar la degradación del ADN..
5. Si el producto contiene humus residual, afectará seriamente la absorbancia del ADN, por lo que debe identificarse mediante una combinación de detección por electroforesis y espectrofotómetro.
6. Evite tocar reactivos líquidos., en caso de contacto accidental, enjuagar inmediatamente con abundante agua.

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