Kit de ensayo de glucógeno
Nota: Tome dos o tres muestras diferentes para predecir antes de la prueba..
Equipo de operación: Lector de espectrofotómetro/ microplato
Numero de catalogo: BC0345
Tamaño:100T/96S
Componentes:
Reactivo de extracto: 100mL×1, Almacenamiento a 4 ℃.
Regente yo: Polvo × 1, almacenamiento a 4 ℃ .10 mg de glucosa, agregar 1 ml de agua destilada para disolverlo antes de usar. Diluido con agua destilada para 0.1 Solución de glucosa mg/ml para espera, preparado para usar. 0.1 Solución estándar de glucosa mg/ml, Almacenamiento a 4 ℃.
Regente ⅱ: Polvo × 1, Almacenamiento a 4 ℃.
Solución de trabajo: Derramar 6 ml de agua destilada en reactivo ⅱ y vierta lentamente 24 ml de ácido sulfúrico concentrado. Disolver y mezclar bien antes de usar. Los reactivos no utilizados son válidos en 4 ° C por una semana.
Descripción del Producto
El glucógeno es un polisacárido de alto molecular compuesto de unidades de glucosa. Es una de las principales formas de almacenamiento de azúcar.. Se almacena principalmente en el hígado y el músculo como energía de respaldo, y se llama glucógeno hepático y glucógeno muscular, respectivamente. El glucógeno puede regular la concentración de glucosa en la sangre. El glucógeno se puede sintetizar en el hígado cuando aumenta la glucosa en sangre. Cuando el azúcar en la sangre disminuye, El glucógeno hepático se descompone en glucosa para complementar el azúcar en la sangre. Por lo tanto, El glucógeno hepático es importante para mantener el equilibrio relativo del azúcar en la sangre. El glucógeno muscular es una forma de almacenamiento de glucógeno en los músculos. Cuando se consume mucho azúcar en la sangre durante el ejercicio extenuante, El glucógeno muscular no se puede descomponer directamente en el azúcar en la sangre. Primero debe descomponerse para producir ácido láctico, que se distribuye al hígado con la sangre, y transformado en glucógeno hepático a través de glucógeno glucógeno.
Principio de determinación: Método de anthRone. El glucógeno se extrae con un extracto alcalino fuerte, y el contenido de glucógeno se mide utilizando un método de anturo en condiciones fuertemente ácidas.
Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados.
SPectrofotómetro/ lector de microplacas, centrífuga de escritorio, pipeta de transferencia, Micro cubeta de vidrio/placa de 96 pocillos, mortero, ácido sulfúrico concentrado (H2SO4) y agua destilada.
Procedimiento:
I. Extracción de muestra:
- Células o bacterias: Recolectar 5-10 millones de bacterias o células en un tubo de centrífuga, Deseche el sobrenadante después de la centrifugación; Agregue 0,75 ml de reactivo de extracción a las bacterias o células de ruptura ultrasónica (fuerza 20% o 200W, 3s ultrasónico, 10S Intervalo, repetir 30 veces) ); Transferir a un tubo de 10 ml, Hervir en un baño de agua hirviendo durante 20 minutos (cierre bien para evitar la pérdida de agua), sacudir el tubo cada 5 min para mezclar completamente; Saca el tubo y enfría, Tome hasta 5 ml con agua destilada y mezcle. Centrífuga a 8000 g y 25 ℃ por 10 minutos, Tome el sobrenadante para realizar pruebas.
- Tejido: Pesar una muestra de 0.1 ~ 0.2g y ponerla en un 10 ml tubo, agregar 0.75 ml de solución de extracción, Hervir en el baño de agua hirviendo para 20 mín. (cierre bien para evitar la pérdida de agua), Agite el tubo de ensayo cada 5 min para mezclar completamente. Después de todo el tejido disuelto, Saca el tubo y enfría, Entonces inventa a 5 ml con agua destilada. Centrífuga a 8000 g y 25 ℃ para 10 mín., Tome el sobrenadante para realizar pruebas.
II. Determinación procedimiento:
- Precaliente el slector de electrofotómetro/ microplato para 30 mín., ajustar la longitud de onda a 620 Nuevo Méjico, poner a cero con destilado
- Mesa de muestreo (Agregue los siguientes regentes en Eptube)
| Regente(µL) | tubo en blanco (A1) | Tubo estándar (A2) | Tubo de ensayo (A3) |
| Muestra | 60 | ||
| Regente yo | 60 | ||
| agua destilada | 60 | ||
| Regente ⅱ | 240 | 240 | 240 |
Mezclar bien, colocar en un baño de agua hirviendo para 10 minutos (cierre bien para evitar la pérdida de agua), Frío, y tomar 200 μL en una cubeta de micro vidrio/placa de 96 pocillos para leer la absorbancia del tubo en blanco, tubo estándar, y tubo de medición en 620 Nuevo Méjico, y grabarlos como A1, A2, y A3. El tubo en blanco y el tubo estándar solo necesitan probarse una vez.
III. Cálculo:
- Peso de la muestra
Sorbitol (mg/g de peso fresco) =(CS × V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W × V1 ÷ V2)÷ 1.11
= 0.450 ×(A3-A1)A2-A1)÷W
- Concentración de proteínas
Sorbitol (mg/mg prot) = (CS × V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1 × RCP) ÷ 1.11
= 0.09 ×(A3-A1) A2-A1) ÷Cpr
- El número de bacterias o células:
Sorbitol （mg/104 célula） = (CS × V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(número de bacterias o células × v1 ÷ v2) ÷ 1.11
= 0.450 ×(A3-A1)A2-A1)÷ número de bacterias o células
1.11: Es una constante que el contenido de glucosa se convierte en contenido de glucógeno, Eso es, el color de 111 μg de glucosa con reactivo anthRone es equivalente al de 100 μg de glucógeno con reactivo anthrone.
CS: la concentración de estándar, 0.1 mg/ml v1: volumen de la muestra, 0.06 mililitros;
V2: Volumen de muestra total, 5 mililitros;
RCP: concentración de proteína de la muestra, mg/mL; W.: Peso de la muestra, gramo
Número de bacterias o células: 104 como la unidad, diez mil
Nota:
Si A es mayor que 1.4, Diluta la muestra con agua destilada y multiplíquela por el factor de dilución correspondiente en la fórmula de cálculo.
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Especificación técnica:
El límite de detección: 0.002 mg/mL
El rango lineal: 0.003125-0.25 mg/mL
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