La BCA (Ácido bicinconínico) El kit de ensayo de proteínas es un método colorimétrico ampliamente utilizado para la cuantificación de concentraciones de proteínas en una muestra.. Este ensayo se basa en la reducción de iones Cu^2+ a Cu^1+ mediante proteínas en condiciones alcalinas., formando un complejo de color púrpura con el ácido bicinconínico. La intensidad del color es directamente proporcional a la concentración de proteínas., permitiendo una cuantificación precisa.
Aquí hay una guía paso a paso sobre cómo usar un Proteína BCA Kit de ensayo:
Materiales necesarios:
- Kit de ensayo de proteína BCA
- Estándares de proteínas (La albúmina sérica bovina se utiliza comúnmente.)
- Muestra que contiene concentraciones de proteínas desconocidas.
- Microplaca o cubetas
- Micropipetas y puntas
- Lector de microplacas o espectrofotómetro
- Agua destilada
Procedimiento:
- Preparación de estándares de proteínas:
- Prepare una serie de estándares de proteínas con concentraciones conocidas.. Estos estándares se utilizarán para crear una curva estándar para la cuantificación.. Las concentraciones comunes son 0, 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, y 1.0 mg/mL.
- Preparación de la muestra:
- Diluya su muestra de proteína a una concentración adecuada dentro del rango lineal del ensayo.. Si es necesario, Es posible que deba realizar una dilución preliminar para garantizar que la muestra se encuentre dentro de la curva estándar..
- Preparación del reactivo de trabajo BCA:
- Mezcle el reactivo BCA A y el reactivo BCA B en un 50:1 relación (normalmente se proporciona en el kit). Asegúrese de mezclar bien.
- Adición de estándares y muestras.:
- Pipetear alícuotas de los estándares de proteínas y la muestra en pocillos separados de una microplaca.. Cada estándar y muestra deben analizarse por duplicado o triplicado..
- Adición de reactivo de trabajo BCA:
- Agregue un volumen adecuado del reactivo de trabajo BCA a cada pocillo que contenga estándares y muestras.. Mezclar bien.
- Incubación:
- Incubar la microplaca a una temperatura adecuada. (normalmente 37°C) para 30 minutos para permitir que se produzca la reacción de color..
- Medición:
- Mida la absorbancia de cada pocillo en 562 nm usando un lector de microplacas o espectrofotómetro.
- Creación de curva estándar:
- Trazar los valores de absorbancia de los estándares frente a sus concentraciones conocidas para crear una curva estándar..
- Cuantificación de la muestra:
- Utilice la curva estándar para determinar la concentración de proteína de su muestra en función de su absorbancia..
- Análisis de datos:
- Calcular la concentración de proteína en la muestra según la curva estándar.. La mayoría de los lectores de microplacas tienen software que puede ayudar en este análisis..
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