| Atributo | Detalles |
|---|---|
| Gato | G1480 |
| Tamaño | 4 x 2ml, 4 x 10 ml, 4 x 20 ml |
| Almacenamiento | -20°C, evitar la luz, valido para 6 meses |
Componentes del kit:
| Reactivo | 4x2ml | 4x10ml | 4x20ml | Almacenamiento |
|---|---|---|---|---|
| Reactivo A: Fijador ALP | 2mililitros | 10mililitros | 20mililitros | RT, evitar la luz |
| Reactivo B: Solución de incubación ALP | B1: Solución AS-BI 1 ml | 5mililitros | 10mililitros | -20°C, evitar la luz |
| B2: Solución FBB 1 ml | 5mililitros | 10mililitros | -20°C, evitar la luz | |
| Reactivo C: Solución roja rápida nuclear | 2mililitros | 10mililitros | 20mililitros | 2-8°C, evitar la luz |
| Reactivo D: Solución verde metilo | 2mililitros | 10mililitros | 20mililitros | RT, evitar la luz |
Introducción:
Fosfatasa alcalina (ALP o AKP) se distribuye ampliamente en los tejidos de los mamíferos, Principalmente en sitios de intercambio de sustancias activas como membranas celulares, retículo endoplásmico, Complejo de Golgi, lisosomas, gránulos de neutrófilos, y membranas de células musculares lisas. El kit de tinción ALP (Método Kaplow) utiliza un método de acoplamiento AZO para demostrar la actividad ALP, Proporcionar resultados confiables en comparación con los métodos de precipitación de sal de metal.
Materiales autoprovisados:
Tobogán de vidrio, Caja húmeda, Microscopio óptico
Protocolo (solo por referencia):
Para manchar o mancha de sección:
- Arregle las manchas o secciones en fijador ALP para 3 minutos, luego lavar con agua destilada.
- Aplicar una solución de incubación ALP, incubar en una caja húmeda en la oscuridad durante 15-20 minutos, luego lavar con agua destilada.
- Reinicie con solución roja rápida nuclear o solución verde metílica durante 3-5 minutos.
- Ver secciones bajo un microscopio después de lavar o sellado con gelatina de glicerol.
Para las células adherentes manchas:
- Enjuague las células cultivadas con PBS, luego arreglarlos con ALP FIJATIVA o 4% PFA, seguido de lavado con PBS.
- Aplicar una solución de incubación ALP, incubar en una caja húmeda en la oscuridad durante 15-20 minutos, luego lavar con PBS.
- Reinicie con solución roja rápida nuclear o solución verde metílica durante 3-5 minutos.
- Lavar con PBS y ver secciones bajo un microscopio.
Resultado:
| Resultado | Color |
|---|---|
| Sitio positivo de ALP | Azul |
| Núcleo | Rojo o verde |
Criterios para jueces de mancha de sangre y médula ósea:
| Nivel positivo | Características de teñido |
|---|---|
| 0 | No Granule |
| 1 | Gránulo ligeramente |
| 2 | Gránulo de grado medio |
| 3 | Gránulo mayoritario |
| 4 | Gránulo completo |
Nota:
- Use muestras frescas y arregle las secciones de inmediato para preservar la actividad enzimática.
- Manejar las células cultivadas suavemente durante la tinción para evitar daños o pérdidas.
- La solución de incubación ALP puede perder efectividad rápidamente, Usar rápidamente.
- Reiniciar con solución roja rápida nuclear o solución verde metílica.
- Incluir un control positivo para cada muestra.
Referencia:
Yu Jiang, Dantiano Zhu, Wenfeng liu, et al. La inhibición de la vía del hedgehog causa atresia folículo primaria y disminuye la capacidad de proliferación de células madre de la línea germinal femenina. Investigación de células madre & Terapia. Julio 2019. (SI 4.627)
Reseñas
Aún no hay reseñas.