ADN polimerasa de arranque en caliente Sanshibio Taq

ADN polimerasa Taq Hot-Start

Artículo No：EH001 Especificación：500Almacenamiento U/1000U/5000U: Conservar a -20°C

Introducción del producto：

Este producto es una enzima de inicio en caliente bloqueada por anticuerpos que suprime la amplificación no específica causada por una mala combinación del cebador o la formación de dímeros del cebador a bajas temperaturas.. Es adecuado para arranque en caliente. PCR. Dado que el anticuerpo se inactiva durante el paso inicial de desnaturalización del ADN de la reacción de PCR, no es necesario ningún tratamiento especial de desactivación; se puede utilizar en condiciones de PCR estándar. El producto de PCR amplificado con este producto tiene una calificación 'A’ base agregada a los 3′ fin, haciéndolo directamente clonable en un T-Vector. También se puede clonar en vectores de extremos romos después del pulido y la fosforilación de los extremos..

Contenido del producto：

Almacenamiento:

Conservar a -20°C, con una vida útil de al menos 12 meses.

Definición de actividad:

Uso del ADN del esperma mahi-mahi activado como plantilla/cebador, la actividad se define como 1 unidad (Ud.) de material insoluble en ácido incorporado, tomando 10 nmol de nucleótidos dentro 30 minutos a 74°C.

Control de calidad:

Este producto ha sido sometido a pruebas de calidad y no tiene actividad desoxirribonucleasa endonucleasa., actividad exonucleasa desoxirribonucleasa, y contaminación por ribonucleasa. El contenido residual del ADN genómico del huésped está por debajo 10 copias.

Usos del producto:

PCR de inicio en caliente; Determinación de la secuencia de ADN.

Instrucciones de uso:

• Deje que los reactivos necesarios se equilibren a temperatura ambiente hasta que se disuelvan por completo.. Mezclar bien bien (no agitar), y utilizar después de una breve centrifugación para evitar la formación excesiva de burbujas y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.. Si se usa con frecuencia, conservar a 4°C. Prepare la mezcla de reacción de PCR de acuerdo con los siguientes componentes (preparar la mezcla de reacción en una caja de hielo):

Sistema de reacción recomendado:

Nota: Las cantidades de cada componente en el sistema de reacción se pueden ajustar según los requisitos reales..

• En general, Se puede usar un método de dos pasos para la reacción; si la amplificación de dos pasos no es satisfactoria, Se puede utilizar un método de tres pasos para configurar el programa de reacción de PCR..

Nota: Las condiciones de reacción se pueden ajustar y optimizar de acuerdo con los requisitos reales.

• Una vez completada la reacción, analizar los resultados experimentales. Para métodos de análisis detallados, consulte el manual de funcionamiento del instrumento de amplificación de PCR.

Precauciones:

1. Elija un recocido apropiado (extensión) temperatura basada en el diseño del cebador. Típicamente, El valor Tm de los cebadores está diseñado para rondar los 60°C.. Para cebadores con temperaturas de recocido más bajas o para amplificar fragmentos largos que exceden 200 pb, Se recomienda un método de tres pasos.. El tiempo de extensión se puede ajustar según la duración del producto de PCR., contenido de GC, y otros factores. El tiempo de extensión por kb de producto está estrechamente relacionado con la complejidad de la plantilla.. Uso de plantillas simples 20 segundos, uso normal de plantillas 30 segundos, y uso de plantillas complejas 1 minuto.
2. Las condiciones de la reacción de PCR deben establecerse de manera diferente según factores como la plantilla., cebadores, longitud del producto de PCR, y contenido de GC. La concentración final de los cebadores comúnmente utilizados se puede ajustar dentro del rango de 0.2-1.0 µM. La concentración de la plantilla de ADN también se puede ajustar en función de su concentración.. Para plantillas complejas o alto contenido de GC, considerar extender los tiempos de desnaturalización/recocido o extensión, y aumento de la temperatura de desnaturalización/recocido.
3. Utilice áreas y pipetas dedicadas antes y después de la amplificación., usar guantes, y cámbalos con frecuencia. Después de la amplificación por PCR, no abra los tubos de reacción directamente. Colóquelos a 4 °C o -20 °C para que se enfríen lo suficiente antes de abrirlos para minimizar el riesgo de contaminación del producto de PCR en el entorno experimental..