2× taq PCR Master Mix(without dye)
Artículo No: E003 Especificación:1mL Storage: Conservar a -20°C
Introducción del producto:
The 2x Taq PCR Master Mix is a premixed solution at twice the concentration of DNA Polymerase, Búfer de PCR, and dNTP Mix. Al usar este producto, Simplemente agregue la plantilla y los cebadores a la solución premezclada, y complete el volumen con DDH2O para la reacción de PCR. Esto simplifica los pasos operativos y reduce el riesgo de contaminación durante los procedimientos de PCR. Este producto ofrece alta sensibilidad, fuerte especificidad, y una amplia gama lineal, Permitir una cuantificación más precisa de los genes objetivo. Los productos de PCR amplificados con este producto tienen una base agregada en los 3′ fin, facilitar la clonación en t vectores.
Contenido del producto:
Componentes | E003 |
2× Mezcla maestra Taq PCR (sin colorante) | 1mililitros |
Almacenamiento:
Conservar a -20°C, con una vida útil mínima de 12 meses.
Control de calidad:
Este producto ha sufrido pruebas de calidad y está libre de actividad de endonucleasa, actividad de exonucleasa, y contaminación por ribonucleasa. El ADN genómico del huésped residual está debajo 10 copias.
Uso de productos:
Amplificación de ADN utilizando el método de PCR; Determinación de la secuencia de ADN.
Instrucciones de uso:
- Permita todas las soluciones de reacción de PCR requeridas para equilibrarse a la temperatura ambiente hasta que se disuelva completamente. Mezcle bien las soluciones y configure el sistema de reacción de PCR en hielo.
- Setting up the PCR reaction system on an ice bath or in a cooler is recommended, Siguiendo el sistema de reacción recomendado como referencia.
- Pipeta a fondo y mezcle el sistema de reacción preparado con una pipeta, Selle los tubos de PCR con tapas, etiquetarlos apropiadamente, y centrifugarse brevemente a temperatura ambiente.
- Coloque los tubos de PCR preparados en el máquina de PCR, Establecer las condiciones de reacción, e iniciar la reacción de PCR.
Sistema de reacción recomendado:
Reactivos | 25µL de volumen del sistema | Concentración final |
2× Mezcla maestra Taq PCR (sin colorante) | 12.5µL | 1× |
Primer yo (10µm) | 0.5-2.5µL | 0.2-1.0µM |
Primer II (10µm) | 0.5-2.5µL | 0.2-1.0µM |
Plantilla ADN | 1μL según sea necesario | - |
Ddh2oh | Hasta 25 μl | - |
Condiciones de reacción:
Under typical circumstances, Se puede usar un método de dos pasos para la reacción. If the two-step amplification is not optimal, Se puede emplear un método de tres pasos para configurar el programa de reacción de PCR. Considering the uncertainty in target gene abundance within the cDNA template, Se recomienda usar 35-38 ciclos para la amplificación inicial y ajuste el número de ciclos en función de los resultados de la amplificación.
Método/pasos | Ajuste de tiempo | Ciclos |
95℃ (Preenaturación) | 2-5mín. | 1 |
95℃ (Desnaturalización) | 10segundo | 28-40Ciclos
(Plásmido o plantilla genómica:28-35ciclos; plantilla de ADNc: 30-40ciclos) |
55℃ -60 ℃ (Recocido) | 30segundo | |
72℃(Extensión) | 1mín. / 1-3kb | |
72℃ (Extensión final) | 5-10mín. | 1 |
4℃/16 ℃( Hold) | ∞ | - |
Nota: Las condiciones de reacción se pueden ajustar y optimizar de acuerdo con los requisitos reales.
Precauciones:
- El tiempo de extensión se puede ajustar según factores como la longitud y el contenido de GC del producto PCR. El tiempo de extensión por kb del producto está estrechamente relacionado con la complejidad de la plantilla: Las plantillas simples requieren 20 segundos, Las plantillas típicas requieren 30 segundos, y las plantillas complejas requieren 1 minuto.
- La configuración de la reacción de PCR debe adaptarse a diferentes condiciones, como la plantilla., cebadores, Longitud del producto PCR, y contenido de GC. La concentración final de cebadores generalmente cae dentro del rango de 0.2-1.0 μm. La concentración de la plantilla de ADN se puede ajustar en consecuencia. Para plantillas complejas o alto contenido de GC, Se recomienda prolongar los tiempos de denaturación/desnaturalización o extensión y aumentar las temperaturas de desnaturalización/recocido.
- Use áreas y pipetas designados antes y después de la amplificación, usar guantes, y cámbalos con frecuencia. Después de completar la reacción de PCR, No abra los tubos de reacción inmediatamente. Permita que se enfríen lo suficiente a 4 ° C o -20 ° C antes de abrir para minimizar el riesgo de contaminación del producto de PCR al entorno de laboratorio.
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