Introducción
- Características de proteinasa K:
- Serina proteasa estable con una amplia especificidad del sustrato.
- Degrada muchas proteínas en el estado nativo incluso en presencia de detergentes.
- No activado por iones metálicos, agentes quelantes (p.ej., EDTA), reactivos de sulfhidrilo, o inhibidores de tripsina o quimotripsina.
- Establo en un amplio rango de pH (4-12.5), con actividad óptima a pH 6,5–9,5.
- La actividad puede ser estimulada por agentes desnaturalizantes (p.ej., Ficha de datos de seguridad (MSDS) y urea).
- La desnaturalización rápida ocurre a temperaturas superiores a 70 ° C.
- Autólisis aumenta a pH alcalino, Pero algunos fragmentos enzimáticos mantienen una actividad proteolítica completa incluso después de una autólisis extensa.
- Aplicaciones:
- Utilizado con frecuencia en biología molecular para digerir proteínas no deseadas, como las nucleasas en el ADN o las preparaciones de ARN.
- Típicamente utilizado a 50–200 μg/ml en preparaciones de ácido nucleico.
- Condiciones óptimas: pH 7.5-8.0 y 37-55°C.
- Los tiempos de incubación varían de 30 minutos para 18 horas.
Especificaciones
| Características | Especificaciones |
| Peso molecular | 29.3kDa |
| Punto isoeléctrico | 8.9 |
| Apariencia | Polvo liofilizado blanco |
| Pureza | 95% (Análisis SDS-PAGE) |
| Actividad específica | ≥34 unidades/mg de proteína |
| Característica de temperatura | La temperatura de actividad efectiva es 37-70 ° C, y la actividad enzimática a 65 ° C es el doble que a 25 ° C. |
| Características del PH | 4.0-12.0, el rango óptimo es ph7.5-11.5 |
| Condiciones de conservación | Se recomienda almacenar a -20 ° C para garantizar su estabilidad en la mayor medida (El transporte o almacenamiento a temperatura normal no reducirá la actividad enzimática.).
La vida del estante está a la altura 3 años a -20 ° C y 2 años a 2 ~ 8 ° C. |
| Método de uso | Prepare 20 mg/ml con la solución, Agregue proteinasa K a la solución digestiva o lisado hasta que la concentración final sea de 50-200ug/ml, e incubar a 55 ~ 70 ° C.
La proteinasa K después de la reacción se puede eliminar o inactivar mediante el método de perlas magnéticas, Método de columna o extracción de fenol-cloroformo. La proteasa K puede inactivarse mediante incubación a 95°C durante 3 minutos o 70°C durante 15 minutos. |
| Detección de residuos de ácidos nucleicos. | Qubit no detectó
Contaminación del ADN humano no detectado (en tiempo real PCR) Contaminación del ADN bacteriano no detectado (16S PCR de imprimación universal, 30 ciclos) Contaminación de ADN fúngico no detectado (Su PCR de imprimación) |
| Detección de nucleasas | ADNasa no detectada
ARNasa no detectada Nickase no detectado |
| Aplicación recomendada | Extracción de ácido nucleico, extracción de ADN circulante, extracción de ácido nucleico del virus |
Ventajas
- Sin incluir RNase, DNasa, y nickase
- Sin residuos de ácido nucleico (no detectado por qubit después de extraer toda la proteína k de 100 mg)
- Sin contaminación de ADN de origen humano (no detectado por Q-PCR)
- Sin contaminación de ADN bacteriano (no detectado por 16S Universal Primer)
- Sin contaminación por ADN fúngico (no detectado por 1TS Universal Primer)
- Puede ser transportado y válido por dos años a temperatura normal en un entorno seco.
- Se puede usar para una extracción de ADN libre altamente sensible, extracción de ácido nucleico del virus, Extracción de ADN de sangre entera, etc..
Información sobre pedidos
| Contenido | C12100 | C12101 | C12102 | PDB-1000 |
| Proteinasa K, liofilizar, >30 unidades/mg de proteína | 1 gramo | 10 gramo | 100 gramo | |
| Buffer PDB (20mm tris, pH 7.5, 10mm caCl2, 50% glicerol, 0.1% Conservantes) | 1000 ml |
Reseñas
Aún no hay reseñas.