Introducción

El kit de ARN viral Hipure es adecuado para purificar ARN viral a partir de muestras como fluidos corporales libres de células o medios de cultivo.. El kit se basa en la tecnología de purificación en columna de gel de sílice.. No requiere extracción tóxica con fenol cloroformo ni precipitación de alcohol que requiere mucho tiempo en la extracción.. Todo el proceso de extracción toma sólo 25 minutos. El kit es adecuado para extraer ARN viral de muestras de fluidos libres de células de 1 a 140 µl, como suero., plasma, fluido corporal o medio de cultivo libre de células. El producto ha eliminado con éxito la hepatitis B A/C., ARN de la hepatitis C, SRAS y VIH. El ARN obtenido se puede utilizar directamente para RT.-PCR, Hibridación Northern y detección de virus..

Detalles

Especificaciones

Principio

La columna de gel de sílice Hipure se basa en una membrana filtrante de fibra de vidrio con alta fuerza de unión. Bajo la condición de alta concentración de agente ionizante. (como guanidina clorhidrato o guanidina isotiocianato), La membrana del filtro puede adsorber ácido nucleico a través de enlaces de hidrógeno y electrostáticos., mientras que las proteínas y otras impurezas no se adsorben y eliminan. La membrana del filtro adsorbida con ácido nucleico se lava para eliminar la proteína residual y la sal. Finalmente, El ácido nucleico adsorbido en la membrana del filtro se puede lavar con baja tampón de sal (como buffer te) o agua. El ácido nucleico obtenido tiene alta pureza y puede usarse directamente en varios experimentos aguas abajo..

La muestra se homogeneiza y se lisa en el lisado., y el ARN se libera en el lisado. La alta concentración de isotiocianato de guanidina contenida en el lisado desnaturaliza e inactiva la RNasa endógena o exógena., mientras que el ARN está protegido de la degradación. El lisado se centrifuga para eliminar las impurezas insolubles.. Después de agregar etanol para ajustar las condiciones de unión., se transfiere a la columna para su filtración. El ARN se adsorbe en la membrana de la columna., mientras que la proteína se elimina sin adsorción. La columna se lava con tampón VHB para eliminar proteínas y otras impurezas., lavado con tampón RW2 para eliminar la sal. Finalmente el ARN se eluye con agua libre de RNasa.. El ARN eluido se puede utilizar directamente en RT-PCR., Mancha del norte, purificación poli-A, traducción in vitro, etc..

Ventajas

• Rápido – Se pueden extraer varias muestras en 20 minutos por método de columna
• Alta calidad – El ARN total de alta pureza se puede utilizar directamente en diversas aplicaciones sensibles posteriores.
• Seguro – no se requiere extracción con fenol cloroformo
• Sensible – El ARN se puede recuperar a nivel de PG
• Alto rendimiento – ARN portador contenido en el producto maximizar la recuperación de ácido nucleico traza

Contenido del kit

Almacenamiento y estabilidad

El ARN portador debe almacenarse a una temperatura de 2 a 8 °C a su llegada.. Sin embargo, almacenamiento a corto plazo (hasta 12 semanas) a temperatura ambiente (15–25°C) no afecta su rendimiento. Los componentes restantes del kit se pueden almacenar a temperatura ambiente. (15–25°C) y son estables durante al menos 18 meses bajo estas condiciones