- Componentes del kit de reactivos
| Especificaciones | 50t | 100t |
| Gato. No. | SN0325-D | SN0326-D |
| Columnas de extracción de ARN (colocar) | 50 (colocar) | 100 (colocar) |
| Columnas de limpieza de ADN (colocar) | 50 (colocar) | 100 (colocar) |
| Tampón de lisis de glóbulos rojos 10x | 60 ml | 2×60 ml |
| Extracción de ARN Buffer 1 más | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampón de eliminación de inhibidores | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampón de lavado 1 | 15 ml | 2×15 ml |
| Tampón de elución | 20 ml | 20 ml |
| Manual de instrucciones | 1 | 1 |
- Almacenamiento
Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) en un ambiente seco y puede conservarse durante 12 meses.
- Instrucciones para usar el kit de reactivos
3.1 Este kit está destinado a fines de investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..
3.2 Algunos componentes del kit contienen irritantes.; es recomendable tomar las precauciones necesarias (como usar ropa y gafas protectoras).
3.3 El uso de este kit requiere equipo adicional como una centrífuga de alta velocidad., baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, nitrógeno líquido, cloroformo, agua desionizada estéril, y tubos EP.
- Introducción al kit de reactivos
El kit de purificación de ARN proporciona un método rápido y eficaz para purificar el ARN de la sangre y otros tejidos fluidos.. Es adecuado para la mayoría de fluidos y tejidos biológicos.. Este kit de purificación de ARN se puede aplicar a muestras de sangre que superan 0.5 ml, y mediante tecnología de eliminación de ADN, el ARN extraído está prácticamente libre de ADN genómico.
El kit RNA Fast Purification permite la extracción de ARN total (Incluyendo ARN nuclear y ARN citoplasmático.) de la sangre dentro 2 horas. El ARN purificado se puede utilizar directamente para aplicaciones como RT-PCR, transferencia Northern, etc.. Todo el proceso de purificación no requiere reactivos tóxicos como el fenol-cloroformo., haciendo que el kit de purificación de ARN sea muy adecuado para otros tipos de muestras.
- Principios y procedimientos experimentales
- Proceso de extracción
Precauciones antes de comenzar el experimento.:
A. Antes de usar, agregue la cantidad especificada de etanol al tampón de lavado 1 como se indica en la etiqueta del frasco de reactivo, y marque una marca en la etiqueta para indicar la adición de etanol..
B.Elution Buffer es una solución TE 0,1x que contiene una cantidad mínima de EDTA. Si el EDTA afecta a experimentos posteriores, se recomienda utilizar agua desionizada estéril como sustituto del Tampón de Elución.
- Procesamiento de muestras: Tome 200 μl de sangre en un tubo EP., agregar 80μL de tampón de lisis de glóbulos rojos 10x, y mezclar bien pipeteando.
- Agregar 500µL de tampón de extracción de ARN 1 más, agitar vigorosamente para mezclar, centrifugar a 12000rpm para 3 minutos.
- Transferir el sobrenadante a un purificación de ADN columna, centrifugar a 12000rpm para 1 minuto.
- Agregar 250µL de etanol al sobrenadante, pipetear y mezclar, transferir el líquido a la columna de purificación de ARN, centrifugar a 12000rpm para 30 segundos, descartar el sobrenadante.
- Agregar 600Tampón de eliminación de inhibidor μL a la columna de purificación de ARN, centrifugar a 12000rpm para 30 segundos, descartar el sobrenadante.
- Agregar 600µL de tampón de lavado 1 a la columna de purificación de ARN, centrifugar a 12000rpm para 30 segundos, descartar el sobrenadante.
(Nota: Confirme que se haya agregado etanol al tampón de lavado. 1. La presencia de etanol afecta significativamente a experimentos posteriores.. Por lo tanto, El secado de la membrana es crucial.. Después de la centrifugación, asegúrese de que no quede etanol antes de la elución, luego deseche los residuos y el tubo de recolección.. Después de usar el tampón de lavado 1, La membrana de la columna de purificación de ARN debe tener un ligero color.. Después de la centrifugación, Retire con cuidado la columna de purificación de ARN., asegurándose de que no toque el tubo de recolección para evitar la interferencia del etanol.)
- Repita el paso 6.
- Centrifugar el tubo vacío a 12000 rpm durante 2 minutos (para evaporar el etanol residual).
- Coloque la columna de purificación de ARN en un tubo de centrífuga nuevo., gotee 100 μl de tampón de elución sobre la membrana, incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos (15℃ ~ 25 ℃), centrifugar a 12000rpm para 1 minuto.
(Nota: La elución de ARN con 50 μl de tampón de elución puede aumentar la concentración de ARN pero reducir el rendimiento total de ARN..)
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