Stuhl Total RNA Extraction Kit

1. Bestandteile des Reagenzienkits

2. Lagerung

Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25°C) under dry conditions and can be kept for 12 Monate. Lysozyme and Proteinase K contain preservatives, allowing for transportation at room temperature. Zur Langzeitlagerung, it should be stored at -20°C.

3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits

3.1 Dieses Kit ist für molekularbiologische Forschungszwecke bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.

3.2 Einige Bestandteile des Kits enthalten Reizstoffe; Es ist ratsam, die erforderlichen Vorsichtsmaßnahmen zu treffen (wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrillen).

3.3 Die Verwendung dieses Kits erfordert zusätzliche Ausrüstung wie eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, flüssiger Stickstoff, Chloroform, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren.

4. Einführung in das Reagenzienkit

The Fecal Total RNA Purification Kit provides a fast and efficient method for purifying total RNA from feces and vomit, widely applicable to the extraction of Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, and viral RNA in feces and vomit samples.

This kit effectively removes impurities and inhibitors from feces and vomit, reducing inhibition in subsequent downstream experiments such as PCR. The extracted RNA can be directly used for PCR, Southern Blot, usw. Der gesamte Reinigungsprozess erfordert keine giftigen Reagenzien wie Phenolchloroform, making the RNA purification kit suitable for various other sample types.

5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren

6. Extraktionsprozess

Vorsichtsmaßnahmen vor Beginn des Experiments:

A. Prior to use, Fügen Sie die angegebene Menge an wasserfreiem Ethanol hinzu WaschenPuffer 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark with a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.

B. Elutionspuffer ist ein 0.1x TE-Lösung enthält eine minimale Menge EDTA. If EDTA may affect subsequent experiments, it is recommended to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.

1. Probenverarbeitung (Inhibitor Removal):

A: Add approximately 200mg of samples such as feces, add 1ml of Humic Acid Removal Reagent I, vortex thoroughly for 1-2 Protokoll, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 2 Protokoll, und den Überstand verwerfen.

B: If the extracted sample is a virus sample, you can proceed directly to step 2. If the sample contains a high amount of inhibitors, it is recommended to perform the inhibitor removal step first, although it may reduce the yield of viral nucleic acid.

2. Sample Lysis:

A: For extracting nucleic acids from bacterial samples, hinzufügen 560μl of Buffer C Plus, 20μl Proteinase K, and 20μl Lysozyme to the centrifuge tube from the previous step. Invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 Protokoll, inverting the tube 6-7 times during digestion.

B: For extracting nucleic acids from virus samples, hinzufügen 560μl of Buffer C Plus and 20μl Proteinase K. Digest at 85℃ for 5 Protokoll, inverting the tube 6-7 times during digestion.

3. Zentrifuge bei 12,000 U/min für 5 Protokoll, Übertragen Sie den Überstand in eine neue Zentrifugenröhre (approximately 500μl liquid transferred).
4. Add an equal volume of anhydrous ethanol, gründlich mischen. Precipitation may occur, Es wirkt sich jedoch nicht auf die nachfolgenden Experimente aus.
5. Übertragen Sie die erhaltene Flüssigkeit in eine RNA -Reinigungssäule (jeweils etwa 650–700 μl), bei Raumtemperatur inkubieren für 2 Protokoll, Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie den gesammelten Abfall, und setzen Sie das Sammelröhrchen für den nächsten Schritt wieder in die Reinigungssäule ein.
6. Place the RNA purification column into a new collection tube, hinzufügen 400μl des Inhibitorentfernungspuffers, Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie den Abfall, and place the nucleic acid purification column back into the tube for the next step.
7. Hinzufügen 500μl Waschpuffer 1zur RNA -Reinigungsspalte, Zentrifuge bei 14,000 U/min (20,00×g) für 2 Protokoll, extending the centrifugation time as needed to ensure membrane drying.

(Notiz: The presence of ethanol has a serious impact on subsequent experiments, so membrane drying is crucial. Nach Zentrifugation, ensure no ethanol is present before elution, then discard the waste and collection tube.)

8. Place the RNA purification column into a new centrifuge tube, hinzufügen 30μl – 50 μl Elutionspufferto the membrane, bei Raumtemperatur inkubieren für 5 Protokoll (15℃-25℃), Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute.

(Notiz: Using 30μl of Elution Buffer to elute RNA can increase RNA concentration but may reduce total RNA yield.)

9. Wiederholen Sie den vorherigen Schritt.

(Notiz: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted in the second wash or continue using the original collection tube to collect RNA.)