Solarbio Malondialdehyd (MDA) Inhaltstest-Kit

Malondialdehyd (MDA) Inhaltstest-Kit

Notiz: Es ist notwendig, vorherzusagen 2-3 große Differenzproben vor der formalen Bestimmung. Betriebsausrüstung: Spektrophotometer.

Katze nein: BC0020

Größe: 50T/48S

Komponenten:

Notiz: Die Arbeitslösung für die MDA -Erkennung ist schwer aufzulösen, die bei 70 ° C erhitzt und heftig vibriert werden kann, um die Auflösung zu fördern. Oder durch Ultraschallbehandlung zur Förderung der Auflösung.

Produktbeschreibung:

• Lipidperoxid wird durch die Wechselwirkung von freien Radikalen mit ungesättigten Fettsäuren erzeugt, Schließlich bilden Verbindungen wie Malondialdehyd (MDA). Der Spiegel der Lipidperoxidation dient als Indikator, Dies kann durch Messung der MDA -Werte bewertet werden.
• Unter sauren und hohen Temperaturbedingungen, eine braunrote Verbindung, 3,5,5-Drei Methylsulfamethoxazol-2,4-zwei-Keton, wird durch eine Kondensationsreaktion zwischen MDA und Thiobarbitursäure synthetisiert (Tba). Diese Verbindung zeigt eine maximale Absorption bei 532 nm. Die Bewertung der Lipidperoxidation beinhaltet eine kolorimetrische Analyse. Jedoch, Das Vorhandensein löslicher Zucker kann den Erkennungsprozess beeinträchtigen. Die Reaktion löslicher Zucker mit TBA erzeugt eine Farbreaktion mit Absorptionswellenlängen bei 450 nm und 532 nm. In diesem Assay -Kit, Der MDA -Gehalt wird durch die Varianz der Absorption bei bestimmt 532 nm, 450 nm, Und 600 nm.
• Aufgrund des Vorhandenseins von Saccharose in Pflanzengeweben und Glukose in tierischen Geweben, Das Kit enthält zwei Computerformeln, die auf Saccharose und Glucose zugeschnitten sind. Diese Formeln sind für die Lipidbewertung geeignet.

Erforderliche, aber nicht bereitgestellte Reagenzien und Ausrüstung:

Spektrophotometer, Wasserbad, Tischzentrifuge, Pipette übertragen,1 ML Glass Cuvette, Mörtel/Homogenisator, Eis und destilliertes Wasser.

Verfahren:

ICH. Probenvorbereitung:

Bakterien oder Zellen:

Sammeln Sie Bakterien oder Zellen in die Zentrifugenröhre. 5 Millionen Bakterien oder Zellen könnten mit gemischt werden mit 1 ML des Extraktionsreagens. Verwenden Sie Ultraschall, um Bakterien und Zellen zu teilen (auf Eis gelegt, Ultraschallleistung 200W, Ultraschallzeit 3 Sekunden, Intervall 10 Sekunden, Wiederholen Sie 30 mal). Zentrifuge bei 8000 ×g für 10 Minuten bei 4 ℃, um unlösliche Materialien zu entfernen, und nehmen Sie den Überstand vor dem Testen auf Eis.

Gewebe:

0.1 G Gewebe könnte mit gemischt werden 1 Ml des Extraktionsreagens und vollständig homogenisiert im Eisbad. Dann zentrifugieren 8000 ×g für 10 Minuten bei 4 ℃, um unlösliche Materialien zu entfernen, und nehmen Sie den Überstand vor dem Testen auf Eis.

Serum:

Erkennen

II. Bestimmung Verfahren:

1. Spektrophotometer vorheizen 30 Protokoll, Null mit destilliertem Setzen
2. Fügen Sie Reagenzien mit der folgenden Liste hinzu:

Die Mischung würde bei 100 ℃ für inkubiert 60 Protokoll (dicht nahe, um Feuchtigkeitsverlust zu verhindern), auf Eis abgekühlt, und zentrifugiert auf 10000 ×g für 10 Minuten bei Raumtemperatur, um unlösliche Materialien zu entfernen. Überstand einnehmen 1 ML Glass Cuvette, und messen die Absorption bei 450 nm, 532 nm und 600 nm.

∆A450 = A450(T)-A450(B), ∆A532 = A532(T)-A532(B), ∆A600 = A600(T)-A600(B). Blankrohr muss ein- oder zweimal testen.

III. Berechnung:

1. Gewebe, Bakterien oder kultivierte Zellen

• Proteinkonzentration:

MDA (Nmol/mg Prot)=(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29× ∆A450)× vrv ÷(CPR × vs)

= 5 ×(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29× ∆A450)÷ CPR

• Probengewicht:

MDA (Nmol/g Gewicht)=( 6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29× ∆A450)× vrv ÷(W × vs ÷ vsv)

= 5 ×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29× ∆A450)÷ w

• CellAmount:

MDA (NMOL/104CELL)=( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 1.29× a∆450)× vrv ÷(400× vs ÷ vsv)

= 0,01 ×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29× ∆A450)

• Serum:

MDA (Nmol/ml)=(6.45×(DA532 -DA600)-1.29× ΔA450)× vrv ÷ vs

= 5 ×(6.45×(DA532 -DA600)-1.29× ΔA450)

2. Pflanzen Gewebe:

• Probengewicht

MDA (Nmol/g Gewicht)= (6.45×(∆A532-∆A600)-0.56× ∆A450)× vrv ÷(W × vs ÷ vsv)

= 5 ×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56× ∆A450)÷ w

• Proteinkonzentration:

MDA (Nmol/mg Prot)=( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56× ∆A450)× vrv ÷(CPR × vs)

= 5 ×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56× ∆A450)÷ CPR

Seil: Gesamtreaktionsvolumen, 1 ml; Vs: Probenvolumen, 0.2 ml;

VSV: Extraktionsvolumen, 1 ml;

Cpr: Proteinkonzentration der Probe, mg/ml; W: Probengewicht, G;

400: Gesamtzahl von Bakterien und Zellen, 5 Million.

Notiz:

Wenn festgestellt wird, dass der Absorptionswert der Probe zu niedrig ist, Die kochende Wasserbadezeit kann von eingestellt werden 60 Minuten bis 90 Minuten oder länger. Die Erkennung von MDA im selben Experiment muss auf die gleiche Zeit erweitert werden, um Fehler zu vermeiden.

Verweise

• Spitz D r, Oberley L w. Ein Assay zur Superoxiddismutaseaktivität bei Säugetiernessue -Homogenaten[J]. Analytische Biochemie,1989
• Masayasu m, Hiroshi y. Eine vereinfachte Assay -Methode zur Superoxiddismutaseaktivität für den klinischen Einsatz[J]. Chemische Klinik

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