1. Bestandteile des Reagenzienkits
| Spezifikationen | 50T | 100T |
| Katze. NEIN. | SN0251 | SN0252 |
| DNA-Extraktionssäulen (Satz) | 50 (Satz) | 100 (Satz) |
| Reagent Buffer IV | 20 ml | 2 × 20 ml |
| Reagenzpuffer C | 30 ml | 2 × 30 ml |
| Reagent Buffer FF | 60 ml | 2 × 60 ml |
| Waschpuffer 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Elutionspuffer | 20 ml | 20 ml |
| Proteinase K | 1ml | 2x1ml |
| RNaseA | 1ml | 2x1ml |
| Bedienungsanleitung | 1 | 1 |
2. Lagerung
Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) und bei trockenen Bedingungen, mit einer Haltbarkeit von 12 Monate. Die DNA-Extraktions-Reinigungssäulen können aufbewahrt werden 1 Jahr in einer kühlen und trockenen Umgebung. Proteinase K und RNase A enthalten Konservierungsstoffe, ermöglicht den Transport bei Raumtemperatur, aber zur Langzeitlagerung, Sie sollten bei -20℃ aufbewahrt werden.
3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits
3.1 Dieses Reagenzienkit ist für die molekularbiologische Forschung bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.
3.2 Einige Komponenten im Reagenzienkit enthalten Reizstoffe. Schutzmaßnahmen wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrille werden empfohlen.
3.3 Während der Verwendung dieses Reagenzienkits, eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren müssen vom Benutzer vorbereitet werden.
4. Einführung in das Reagenzienkit
Paraffin-embedded tissue DNA-Reinigung kit provides a rapid and effective DNA purification solution for samples in paraffin sections. Tissues are collected after paraffin dissolution using a dedicated dewaxing solution, and sample DNA is obtained through subsequent extraction processes.
This kit can extract sample DNA from paraffin sections within 30 Protokoll, und der gesamte Reinigungsprozess erfordert keine giftigen Reagenzien wie Phenol-Chloroform. Die extrahierte DNA kann direkt verwendet werden PCR, Southern Blot, und andere Anwendungen.
5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren
6. Extraktionsprozess
Vor Beginn des Experiments:
A. Reagent Buffer FF:This buffer should be stored long-term in an environment between 2°C and 8°C.
B. Reagent Buffers IV and C kann bei niedrigen Temperaturen ausfallen. Es wird empfohlen, es auf 65°C zu erhitzen 5 Protokoll. Nachdem sich der Niederschlag aufgelöst hat, the solution can be used normally.
C. WaschenPuffer 1 should have a specified amount of anhydrous ethanol added before use, as indicated on the reagent bottle label. Check the label with a tick mark to indicate the addition of anhydrous ethanol.
D. Elutionspuffer ist ein 0.1x TE-Lösung with a minimal amount of EDTA. Wenn EDTA nachfolgende Experimente beeinflusst, it is advisable to replace the elution buffer with sterile deionized water.
- Probenverarbeitung:
Select 5-10 paraffin sections (1mm-3mm thickness), use scissors to remove excess wax, and cut the embedded tissue sample into small pieces. Place them in a 1.5ml centrifuge tube, hinzufügen 800μl Reagent Buffer FF, incubate at 75°C for 5 minutes until all paraffin is dissolved. Zentrifuge bei 12000 U/min für 5 Protokoll, Den Überstand verwerfen.
- Hinzufügen 400μl Reagent Buffer IV, 20μl Proteinase K (10 mg/ml), and 10μl RNaseA (10 mg/ml) to the precipitate from the previous step. Digest at 65°C, stirring every 6-7 Zeiten, bis die Verdauung abgeschlossen ist.
- Fügen Sie eine gleiche Menge hinzu Reagenzpuffer CUnd an equal volume of anhydrous ethanol, durch Pipettieren gründlich mischen.
(Zum Beispiel: If you add 400μl Reagent Buffer IV, approximately add 430μl Reagent Buffer C and 430μl anhydrous ethanol. Some precipitation may occur after adding Reagent Buffer C, Dies hat jedoch keinen Einfluss auf nachfolgende Experimente.)
- Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (or cartridge) (jeweils etwa 650–700 μl), let it stand at room temperature for 2 Protokoll, centrifuge at over 8,000rpm for 1 Minute. Discard the collected waste and reinsert the collection tube into the purification column for the next step.
- Schritt wiederholen 4, Zugabe der restlichen Flüssigkeit zur DNA-Extraktions-Reinigungssäule (or cartridge), centrifuge at over 8,000rpm for 1 Minute, Verwerfen Sie den Abfall und das Sammelrohr.
- Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (or cartridge) in das Sammelröhrchen, hinzufügen 300μl WaschenPuffer 1, centrifuge at over 8,000rpm for 1 Minute. Discard the waste and reinsert the purification column into the tube for the next step.
(Notiz: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Waschen Puffer 1.)
- Hinzufügen 500μl WaschenPuffer 1 zur DNA-Extraktions-Reinigungssäule (or cartridge), centrifuge at 14,000rpm (20000×g) für 2 Protokoll. Extend centrifugation time if needed for a dryer membrane.
- Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (or cartridge) in einer neuen Zentrifugenröhre, Öffne den Deckel, bei 65 ° C inkubieren für 2 Protokoll. Extend this step if necessary to evaporate ethanol to prevent residual ethanol from affecting downstream experiments.
- Suspend the addition of 50-100μl Elution Buffer to the membrane, centrifuge at 12,000rpm for 2 Protokoll.
(Notiz: 1. Using 50μl Elution Buffer for DNA elution can increase DNA concentration but decreases total DNA yield. 2. Die eluierte DNA kann erneut auf die DNA-Extraktions-Reinigungssäule aufgetragen werden, centrifuged at 12000rpm for 2 minutes again to increase DNA yield.)
Rezensionen
Es gibt noch keine Rezensionen.