超純RNA萃取試劑盒 (三唑)

1. 試劑盒的組成

規格	50時間	100時間
貓. 不.	SN0303	SN0304
RNA萃取柱 (放)	50 (放)	100 (放)
脫氧核糖核酸酶I	1毫升	1毫升
10 × 反應緩衝液	1 毫升	2 ×1毫升
三唑緩衝液	50 毫升	2 × 50 毫升
抑制劑去除緩衝液	30 毫升	2 × 30 毫升
洗滌緩衝液 1	15 毫升	2 × 15 毫升
洗脫緩衝液	20 毫升	2 ×20毫升
使用說明書	1	1

 

2. 貯存

該試劑盒應在室溫下保存 (15-25℃) 在乾燥環境下穩定 12 月. DNase I 含有防腐劑, 允許在室溫下運輸, 但為了長期儲存, 應保存在-20℃.

3. 試劑盒使用說明

3.1 該試劑盒旨在用於分子生物學研究目的，不應用於疾病診斷或治療.

3.2 套件中的某些成分含有刺激物; 建議採取必要的預防措施 (例如穿著防護衣和護目鏡).

3.3 使用該套件需要額外的設備，例如高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 液態氮, 氯仿, 無菌去離子水, 和EP管.

4. 試劑盒簡介

此RNA純化試劑盒利用傳統的TRIzol結合柱膜法對植物進行快速純化, 動物, 組織, 細胞, 微生物RNA, 和真菌菌絲RNA. 它適合大多數物種. 此RNA純化試劑盒可應用於超過植物組織 100 毫克. 此試劑盒萃取的RNA DNA含量極低. 如果實驗中對 DNA 的敏感度是一個問題, 建議在管柱上使用 DNase I 消化.

RNA快速純化試劑盒可從樣本中萃取總RNA (包括核RNA和細胞質RNA) 之內 1 小時. 萃取的RNA可直接用於RT-聚合酶鍊式反應, 北方印跡, 和其他應用.

5. 實驗原理和程序

6. 提取過程

開始實驗前的注意事項:

A. 使用前, 加入規定量的無水乙醇 洗緩衝 1 根據試劑瓶上的標籤, 並勾選標籤上的方框，表示已添加無水乙醇.

乙. 洗脫緩衝液是 0.1x TE 解決方案 含有極少量的 EDTA. EDTA是否影響後續實驗, 建議用無菌去離子水更換洗脫緩衝液.

1. 樣品加工:

A. 組織: 如果新鮮材料不能立即使用, 將它們放入液態氮中並儲存在-80°C. 乾燥後的物料可在室溫下保存. 將30~80 mg組織在液態氮中研磨並添加 1 毫升 Trizol 緩衝液 用於均質化.

乙. 單層培養細胞: 吸出培養基並添加 1 毫升 Trizol 緩衝液 用於均質化.

C. 細胞懸浮液: 離心收集細胞並添加 1 毫升 Trizol 緩衝液 用於均質化.

2. 添加後 三唑緩衝液 到樣品, 透過移液器充分混合, 讓樣品完全裂解, 並在室溫下孵育 5 分分鐘.

3. 以以下比例添加氯仿 200 每微升 1 毫升 Trizol 緩衝液, 劇烈搖晃 30 秒, 並在室溫下孵育 2 分分鐘.

4. 4°C 離心裂解液, 12,000 轉速為 10 分分鐘. RNA 將存在於上層水相中.

5. 小心地將上清液轉移至新的離心管中, 避免中底層的收集. (筆記: 大約 400 可轉移μl液體, 對於某些物種來說可能更少.)

6. 加入等體積預冷的無水乙醇, 快速混合. (例如, 添加 400 µl 裂解液, 添加 400 μl 無水乙醇. 如果裂解液體積小於 400 微升, 比例減少無水乙醇的量. 添加乙醇後可能會形成輕微沉澱, 但不影響後續實驗.)

7. 將所得的液體轉移至RNA純化柱 (大約 650-700 每次μl), 離心機轉速超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄收集的廢棄物, 並將收集管重新插入純化管柱進行下一步.

8. 重複步驟 7, 將剩餘液體加入RNA純化管柱中, 離心機轉速超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢棄物和收集管.

9. 將 RNA 純化管柱放入新的收集管中, 添加 300 µl 抑制劑去除緩衝液, 離心機轉速超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢棄物, 並將RNA純化柱重新插入管中以進行下一步.

10. 添加 80 µl DNase IRNA純化管柱的工作溶液, 在 20°C 至 30°C 下孵育 15 分分鐘. (準備 DNase I 工作溶液: 62 µl 無 RNase 水, 8 μl 10×反應緩衝液, 和 10 微升DNA酶I, 彌補 80 µl DNase I 工作液.)

11. 添加 300 µl 抑制劑去除緩衝液至RNA純化柱, 離心機轉速超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢棄物, 並將RNA純化柱重新插入管中以進行下一步.

12. 添加 700 µl 洗滌緩衝液 1至RNA純化柱, 離心機在 14,000 轉速 (20,000×g) 為了 2 分分鐘, 如果需要乾燥膜，請延長離心時間. (筆記: 確認洗滌緩衝液中添加了乙醇 1; 乙醇的存在顯著影響後續實驗. 離心後洗脫前確保膜乾燥. 丟棄廢棄物和收集管. 使用洗滌緩衝液後 1, RNA純化柱上的薄膜應該只有輕微的顏色. 離心後小心取出RNA純化管柱, 確保它不接觸收集管以避免乙醇污染.)

13. 將 RNA 純化管柱放入新的離心管中, 滴 100 µl 洗脫緩衝液到膜上, 室溫孵育 5 分分鐘 (15°C 至 25°C), 和離心機在超過 8,000 轉速為 1 分分鐘. (筆記: 洗脫 RNA 50 μl 的洗脫緩衝液可以增加 RNA 濃度，但會降低總 RNA 產量.)

14. 重複上一步. (筆記: 可使用新的離心管收集第二次洗脫的RNA或繼續使用原收集管收集RNA.)