糞便或土壤基因組 DNA 萃取試劑盒

1. 試劑盒的組成

規格	50時間	100時間
貓. 不.	SN0241	SN0242
DNA萃取柱 (放)	50 (放)	100 (放)
腐植酸去除試劑I	50毫升	2x50毫升
腐植酸去除試劑II	50毫升	2x50毫升
試劑緩衝液IV	30 毫升	2×30 毫升
試劑緩衝液 C plus	30 毫升	2×30 毫升
抑制劑去除緩衝液	30毫升	2x30毫升
溶菌酶	1毫升	2x1毫升
蛋白酶K	1毫升	2x1毫升
核糖核酸酶A	1毫升	2x1毫升
洗滌緩衝液 1	15 毫升	2 × 15 毫升
洗脫緩衝液	20 毫升	2 ×20毫升
使用說明書	1	1

2. 貯存

該試劑盒應在室溫下保存 (15-25℃) 並且在乾燥條件下, 保存期限為 12 月. DNA 萃取純化柱可保存 1 在涼爽乾燥的環境中度過一年. 溶菌酶, 蛋白酶K, 和 核糖核酸酶A 含防腐劑, 允許在室溫下運輸, 但為了長期儲存, 應保存在-20℃.

3. 試劑盒使用說明

3.1 本試劑盒適用於分子生物學研究，不得用於疾病診斷或治療.

3.2 試劑盒中部分成分含有刺激物. 建議採取防護措施，例如穿著防護衣和護目鏡.

3.3 本試劑盒使用過程中, 高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 無菌去離子水, 和EP管需用戶自備.

4. 試劑盒簡介

該試劑盒提供了一種快速有效的從土壤中純化微生物基因組 DNA 的方法, 屎, 和嘔吐物樣本. 廣泛用於土壤中微生物DNA的萃取, 屎, 並嘔吐.

 

此試劑盒有效去除樣品雜質和抑制劑, 減少下游實驗中的抑制反應，例如 聚合酶鍊式反應. 整個純化過程不需要苯酚氯仿等有毒試劑. 萃取的DNA可直接用於PCR, 南方印跡, 和其他應用.

5. 實驗原理和程序

6. 提取過程

開始實驗前:

A. 試劑緩衝液 四號 低溫條件下可能會沉澱. 我們建議在 65℃ 加熱 5 分分鐘. 沉澱溶解後, 可以正常使用.

乙. 使用前, 加入規定量的無水乙醇 洗滌緩衝液 1 如瓶子標籤上所示. 在標籤上打勾，表示添加了無水乙醇.

C. 洗脫緩衝液是 0.1x TE 解決方案 含有極少量的 EDTA. EDTA是否可能影響後續實驗, 建議用無菌去離子水取代洗脫緩衝液.

1. 樣品加工 (抑制劑去除):

A. 糞便和嘔吐物樣本: 加入約200mg待萃取樣品, 添加 1腐植酸去除試劑 I 毫升, 徹底渦旋 1-2 分分鐘, 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘, 棄去上清液, 添加 560µl 緩衝液 IV 到顆粒, 翻轉並充分混合, 85℃消化 5 分分鐘, 反轉並混合 6-7 消化過程中的次數, 然後繼續 步 2.

乙. 土壤樣本: 重量約0.1公克-0.5克篩過的土壤, 添加 500μl 緩衝液 IV 和 100μl 腐植酸去除試劑 I, 翻轉並充分混合, 85℃消化 5 分分鐘, 反轉並混合 6-7 消化過程中的次數, 然後繼續 步 2.

(筆記: 腐植酸去除試劑I/腐植酸去除試劑II 主要用於腐植酸含量高的土壤, 例如森林土壤和沈積土. 添加 1腐植酸去除試劑 I 毫升 到樣品, 渦流, 搖動 1-2 分分鐘, 離心機在 8,000 轉速為 2 分分鐘, 棄去上清液, 然後加 1腐植酸去除試劑 II 毫升, 渦流, 離心機在 8,000 轉速為 2 分分鐘, 棄去上清液. 此步驟可進一步減少土壤腐植酸抑制劑，但會顯著降低 DNA 產量.)

2. 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘, 將上清液轉移至新的離心管中 (轉移約 500μl 液體), 加入20μl蛋白酶K (10 毫克/毫升), 20µl 溶菌酶, 和 20μl RNase A, 並在 65℃ 下孵育 2 分分鐘.
3. 加入等體積的 試劑 緩衝液C+ (轉移約 560μl 液體) 至裂解物, 攪拌均勻. 如果出現白色沉澱, 讓它解決; 沉澱消失後不影響後續實驗.
4. 加入等體積的乙醇 試劑 緩衝液C+ (例如, 添加 560微升的 試劑 緩衝液C+, 然後加入560μl乙醇), 攪拌均勻. 可能會有降水, 但不影響後續實驗.
5. 將所得液體加入DNA萃取純化管柱中 (袖子) (每次約650-700μl), 離心機超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄收集的廢液, 並將收集管重新插入DNA萃取純化管柱中 (袖子) 下一步.
6. 添加 400µl 抑制劑去除緩衝液, 離心機超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢液, 並重新插入 DNA純化 將柱放入套筒中以進行下一步.
7. 添加 500µl 洗滌緩衝液 1 至DNA萃取純化管柱 (袖子), 離心機在 14,000 轉速 (20,000×g) 為了 1 分分鐘.
8. 添加 300µl 洗滌緩衝液 1 再次進入DNA萃取純化管柱 (袖子), 離心機在 14,000 轉速 (20,000×g) 為了 2 分分鐘.
9. 放置DNA萃取純化管柱 (袖子) 放入新的離心管中, 打開蓋子, 並在 65℃ 下孵育 2 分分鐘. 如有必要延長此步驟，盡可能蒸發乙醇，防止乙醇殘留影響下游實驗.
10. 滴 100µl 洗脫緩衝液 到膜上, 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘.

(筆記: 1. 用 50μl Elution Buffer 洗脫 DNA 可以增加 DNA 濃度，但會降低總 DNA 產量; 2. 洗脫的 DNA 可重新上樣至 DNA 萃取純化柱, 再次離心 12,000 轉速為 2 分分鐘, 並收集以增加 DNA 產量.)