- 試劑盒的組成
| 規格 | 50時間 | 100時間 |
| 貓. 不. | SN0205 | SN0206 |
| DNA萃取柱 (放) | 50 (放) | 100 (放) |
| 試劑緩衝液 I | 20 毫升 | 2×20 毫升 |
| 試劑緩衝液 II | 15 毫升 | 15 毫升 |
| 試劑緩衝液C | 30 毫升 | 2 × 30 毫升 |
| 洗脫緩衝液 1 | 15 毫升 | 2 × 15 毫升 |
| 洗滌緩衝液 | 20 毫升 | 20 毫升 |
| 核糖核酸酶A | 1毫升 | 1毫升 |
| 使用說明書 | 1 | 1 |
- 貯存
該套件應在室溫下保存 (15-25℃) 乾燥條件下可保存 12 月. DNA萃取純化柱可在陰涼乾燥的環境中保存長達 1 年. RNase A 含有防腐劑，可在室溫下運輸, 但為了長期儲存, 應保存在-20℃.
- 試劑盒使用說明
3.1 該試劑盒旨在用於分子生物學研究目的，不應用於疾病診斷或治療.
3.2 套件中的某些成分含有刺激物; 建議採取必要的預防措施 (例如穿著防護衣和護目鏡).
3.3 使用該套件需要額外的設備，例如高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 液態氮, 氯仿, 無菌去離子水, 和EP管.
- 試劑盒簡介
The new plant genome DNA純化 kit provides a rapid method for DNA purification. 使用特定試劑緩衝液 II 和 C 有效沉澱 DNA, 透過吸附柱收集高純度DNA.
此試劑盒廣泛適用於植物組織和真菌樣本的分離, 能夠從植物和真菌中提取總 DNA 30 分分鐘. 萃取過程不涉及苯酚、氯仿等有毒試劑. 萃取的DNA可直接用於下游實驗，例如 聚合酶鍊式反應 和Southern印跡.
- 實驗原理和程序：
- 提取過程
開始實驗前的注意事項:
A. 試劑緩衝液 I 和試劑緩衝液 C 在低溫下容易沉澱. 建議在 65°C 下加熱 5 分鐘直至沉澱物溶解後再正常使用.
乙. 使用前 洗滌緩衝液 1, 按照試劑瓶標籤上的指示添加指定量的無水乙醇並標記勾號 (√) 標籤上註明添加了無水乙醇.
C. 洗脫緩衝液是 0.1x TE 解決方案 含有極少量的 EDTA. EDTA是否影響後續實驗, 建議用無菌去離子水取代洗脫緩衝液.
1. 樣品加工:
A. 材料收集和儲存
如果新收集的材料無法立即使用, 將其放入液態氮中冷卻，最後保存在-80°C. 乾燥後的物料可在室溫下保存.
乙. 如果條件允許, 盡可能收集新鮮材料, 因為新鮮材料含有較少的多醣和多酚.
C. 從液體培養物中收集真菌時, 分離液體並透過離心收集真菌細胞.
2. 權衡一下 100 mg新鮮樣品或不超過 20 mg乾燥材料並用液態氮研磨.
(筆記: 不同的樣品量可能會有所不同; 建議透過實驗前的試驗來優化樣品量.)
3. 添加 400μl 試劑緩衝液 I 和 10μl RNaseA (10 毫克/毫升), 確保地面樣本中沒有團塊. 團塊難以溶解, 降低 DNA 產量. 也, 不要混在一起 試劑緩衝液 I 和 RNaseA 使用前.
4. 65°C 下孵育 5 分分鐘, 輕輕翻轉混合物 2-3 次. 此步驟用於細胞裂解. 如果樣品難以裂解, 延長孵育時間, 但不超過 30 分分鐘.
5. 添加 130µl 試劑緩衝液 II 並攪拌均勻, 然後冰浴 5 分分鐘 (此步驟用於沉澱多醣和蛋白質).
6. 將裂解液離心 5 分鐘在 14,000 轉速 (20,000×g).
(筆記: 有些植物材料在這一步驟可能含有許多黏稠物質, 可以在後續步驟中剪切DNA. 所以, 理想的狀態是在此步驟中去除這些物質. 離心後, 將上清液轉移至新的離心管中. 如果離心後上清液中有大量絮狀物質, 表示初始樣本量太大. 考慮減少初始樣本量。)
7. 小心地將所得的液體轉移至新的離心管中.
(筆記: 可轉移約450μl液體; 對於某些物種, 可能小於 450μl.)
8. 加入等體積的 試劑緩衝液C 裂解液中加入等體積的無水乙醇，混勻.
(例如: 加入 450μl 試劑緩衝液 C, 然後加入450μl無水乙醇. 如果裂解液體積小於450μl, 比例減少試劑緩衝液 C 的量. 添加Reagent Buffer C會產生輕微沉澱, 但不影響後續實驗.)
9. 將所得液體加入DNA萃取純化管柱中 (成套工具) (每次約650-700μl), 離心機在大於 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄收集的廢棄物, 並將收集管重新插入純化管柱進行下一步.
10. 重複步驟 9, 將剩餘液體加入DNA萃取純化管柱中 (成套工具), 離心機在大於 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢棄物和收集管.
11. 放置DNA萃取純化管柱 (成套工具) 進入收集管, 添加 300µl 洗滌緩衝液 1,離心機在大於 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢棄物, 並放置DNA萃取純化管柱 (成套工具) 放回管中進行下一步.
(筆記: 確認洗滌緩衝液中添加了無水乙醇 1.)
12. 添加 500µl 洗滌緩衝液 1 至DNA萃取純化管柱 (成套工具), 離心機在 14,000 轉速 (20,000×g) 為了 2 分分鐘, 適當延長離心時間，確保膜充分乾燥.
13. 放置DNA萃取純化管柱 (成套工具) 放入新的離心管中, 讓它不被覆蓋, 並在 65°C 下孵育 2 分分鐘. 根據需要延長此步驟，蒸發乙醇，防止乙醇殘留影響下游實驗.
14. 吸管 100µl 洗脫緩衝液 到柱膜上, 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘.
(筆記: 1. 使用 50μl Elution Buffer 洗脫 DNA 可提高 DNA 濃度，但會降低整體 DNA 產量; 2. 含有 DNA 的洗脫液可重新加入 DNA 萃取純化管柱並在 100 ℃ 下離心。 12,000 轉速為 2 再次分鐘以增加 DNA 產量.)
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