鴿子皰疹病毒 (皮高壓病毒) 核酸檢測試劑盒 (聯合國非政府組織, PCR-螢光探針法)

編號: AP2409002 規格: 50時間/100時間 貯存: -20℃

產品介紹:

鴿子皰疹病毒 (皮高壓病毒) 是由鴿子皰疹病毒型引起的主要影響幼鴿的病毒性傳染病 1 (皮HV1). 它是導致幼鴿乳鴿病綜合症的重要病原體. 臨床上, 其特徵是鼻腔和結膜發炎等症狀. 受感染的鴿子也可能表現出憂鬱症, 食慾下降, 腹瀉, 嘔吐, 和神經系統症狀. 所以, 早期的, 迅速的, 便捷的PiHV檢測對於診斷至關重要, 減緩疾病的傳播, 並預防併發症. 此檢測試劑盒是根據PiHV基因中的保守序列設計的, 具有最佳化的條件, 實現準確的螢光定量 聚合酶鍊式反應 口語測試, 泄殖腔拭子, 血, 以及鳥類的其他組織樣本. 這樣可以快速確定宿主是否感染 PiHV.

產品內容:

試劑成分	AN2409002-02 (50時間)	AN2409002-03 (100時間)
PiHV檢測試劑	1150微升	1150µL× 2
PiHV 陽性對照	100微升	100微升
陰性對照	100微升	100微升

儲存條件:

-20℃保存, 保存期限至少為 12 月.

實驗操作:

1. 樣品製備 (樣品製備區)

1.1 樣品要求:

-口腔/局部拭子: 使用無菌棉籤插入鳥的喉嚨或泄殖腔, 旋轉三遍. 取出並放入離心管中, 剪掉暴露的部分, 然後蓋緊管子並貼上標籤. 可測試的樣品 24 2-8°C 下可保存數小時; 無法及時檢測的樣本應保存在-20°C.

-全血: 使用 EDTA 作為抗凝血劑; 不要使用肝素. 需要新鮮全血, 或在2-8°C下保存不超過 7 天, 或在-20°C 不超過 3 月. 應盡可能避免反覆凍融循環.

-組織: 取新鮮肝組織不超過 100 毫克, 並以200-500μL無菌水製備組織勻漿以進行後續樣本製備.

1.2 樣品製備:

參考三世生物的 “動物基因組DNA快速萃取試劑盒 (用於 PCR 分析) 手動的” (目錄號: DP202), 或其他符合相關要求的核酸萃取試劑盒/方法, 從處理過的樣本中萃取核酸. 萃取的核酸樣本應置於冰盒中並儘快進行檢測; 它們可以在 4°C 下保存不超過 7 天或在-20°C 不超過 6 月.

2. 準備反應系統 (樣品添加區)

2.1 取出套件中的每個組件, 室溫下完全解凍, 和離心機 10 幾秒鐘內從管壁和底部的蓋子收集液體. 依樣品數量配製反應體系 (n+2) (IE。, n 測試樣本 + 1 陽性對照 + 1 陰性對照). 具體來說, 準備 (n+2) PCR管, 將 23μL PiHV 測試試劑分配到每個管中, 並將它們保存在冰盒中以備後用.

2.2 然後, 依序加入2μL陰性對照, 萃取樣本核酸, 和 PiHV 檢測試劑陽性對照. 蓋緊管子並記錄訊息; 每個反應的總體積應為25μL. 充分混合, 離心機用於 10 秒, 並在PCR儀上進行擴增實驗.

3. PCR擴增 (擴增及產物分析區)

50°C UNG 酶淨化 2 分分鐘; 95°C 預變性 2 分分鐘; 95°C 變性 10 秒, 然後進行 60°C 退火和延伸 35 秒, 為了 40 週期, 在 60°C 收集螢光訊號. 選擇螢光通道 FAM (如果使用ABI系列或類似的即時定量PCR儀器, 如果需要請提前聯繫製造商或自行添加 ROX 校準染料; 否則, 遵循正常程序).

4. 結果判定

4.1 驗證實驗結果的條件:

陽性對照 FAM 通道 Ct 值 < 28 並展出了 “S” 成形擴增曲線; 陰性對照無Ct值或Ct值≥ 38 和不 “S” 成形擴增曲線, 表示有效結果; 否則, 重複實驗. 如果重新測試仍然無效, 請聯絡廠商技術人員.

4.2 樣品結果測定:

CT值≤ 33 並展出了 “S” 成形擴增曲線, 判定為 PiHV 陽性;

CT值 33 < CT < 38 被認為可疑; 建議重新測試 (核酸萃取可能不合格或存在強抑制性污染物 (例如, 消毒劑殘留, 抗凝血劑) 抑制放大; 建議對樣本進行後處理以進行核酸萃取和擴增; 首先排除氣溶膠污染造成的假陽性結果，然後再重新萃取核酸並重新檢測). 如果排除氣溶膠污染並且FAM通道重新測試Ct值 < 33 具有清晰的擴增曲線, 判定為PiHV陽性; 否則, 被判定為負數;

無Ct值或Ct值≥ 38 和不 “S” 成形擴增曲線確定為 PiHV 陰性.

預防措施:

• 為防止污染, 實驗應嚴格分區, 分區之間最好物理隔離，避免人為因素造成的交叉污染. 實驗過程中穿實驗服和乳膠手套, 在不同領域獨立使用工具, 需要時更換手套和實驗室外套. PCR後, 不要立即打開蓋子; 充分冷卻後打開，以最大程度地減少氣溶膠污染.
• 使用前將試劑完全解凍, 但避免反覆凍融循環. 套件中提供的PCR反應管為0.2mL; 如果需要更換, 完全解凍後轉移. 嚴格按照試劑製備及樣品添加說明進行操作. 工作站, 離心機, 移液器, 及其他器具應定期以含氯消毒劑消毒, 酒精, 核酸去污劑, 或紫外線.
• 陰性結果不一定代表宿主沒有感染病毒. 樣品品質差, 病毒量低, 或存在強抑制物質 (例如酒精, 消毒劑, 抗凝血劑, ETC。) 可能會導致核酸萃取不成功 (偵測) 和一個 “消極的” 結果. 遵循結果解釋標準, 當出現可疑結果時, 首先排除氣溶膠污染. 如果還有其他問題, 聯絡廠商技術人員.
• 本產品僅供一次性使用. 試劑中的成分對自然光敏感; 包裝及儲存過程應避免光照. 包裝後, 請勿反覆凍融. 僅供科學研究使用; 不用於臨床診斷或其他目的.