該產品需要冰袋包裝並透過 FedEx 或 UPS 運輸.
它將在 7-10 天. 運費包含在產品價格中.
產品介紹：
此試劑盒可擴增並檢測羽毛等樣本中的CHD-W保守基因, 血, 和鸚鵡的組織, 從而確定他們的性別. 透過引入內生內部參考, 核酸萃取和擴增過程可監控，確保檢測結果的準確性.
產品內容：
| 試劑成分 | AN2304001-01（24T） | AN2304001-02（48T） |
| CW反應液 | 23µL/孔×8孔/條×3條 | 23µL/孔×8孔/條×6stips |
| CW 陽性對照 | 100微升 | 100微升 |
| 陰性對照 | 100微升 | 100微升 |
儲存條件：
-20℃保存, 保存期限至少為 12 月
實驗操作：
1. 樣品製備 (樣品製備區)
1.1 樣品要求：
羽毛: 至少收集 5 胸部的羽毛, 腹部, 或腿 (包括羽軸部分), 並且不要使用自然脫落的羽毛.
血: 使用 EDTA 作為抗凝血劑, 不要使用肝素作為抗凝血劑. 應使用新鮮全血, 或可在2~8℃保存長達 7 天, 或在-20℃保存長達 3 月. 盡量避免反覆凍融.
組織: 取新鮮肌肉或器官組織 (避免使用帶皮膚的樣品, 肌腱, 或難以加工的筋膜) 不超過100mg. 使用200-500μL無菌水製備組織勻漿, 然後進行後續的樣品製備.
1.2 樣品製備：
請參考三獅生物 “動物基因組DNA快速萃取試劑盒 (為了 聚合酶鍊式反應 分析)” 手動的 (零件號: DP202), 或其他符合相關要求的核酸萃取試劑盒/方法, 提取處理後的樣本. 將萃取的樣本核酸放入冰箱，盡量盡快進行檢測. 它可以在 4°C 下保存長達 7 天或在-20°C 下長達 6 月.
2 . 反應體系的製備 (加入樣品的反應區).
2.1 取出n+2個含有CW陽性對照的反應管, CW 陰性對照, 以及實驗所需的反應液 (n表示待測樣本數, 加 1 陽性對照, 和 1 陰性對照). 將試劑在室溫下完全解凍, 離心機用於 10 秒, 並將管壁和蓋子內的液體旋轉至管底. 將它們放入冰箱中以備後用.
2.2 然後, 添加2μL陰性對照, 萃取樣本核酸, 依序對反應液進行CW陽性對照. 關閉管蓋, 做出適當的記錄, 並保證每次反應總體積為25μL. 徹底混合內容物, 離心機用於 10 秒, 然後在PCR儀上進行擴增實驗.
3. PCR擴增 (擴增及產物分析區).
95°C 預變性 3 分分鐘; 95°C 變性 10 秒, 58°C 退火和延伸 30 秒, 為了 35 週期, 58°C 收集螢光訊號. 螢光通道 1 應設定為 FAM (CHD-W基因), 和頻道 2 應設定為 VIC/HEX (內參基因) (使用ABI系列即時螢光定量PCR儀時, 如果需要的話, 提前聯繫廠商或自行添加ROX校準染料; 否則, 遵循正常程序).
4. 結果判定
4.1 如果 FAM 通道和 VIC/HEX 通道中陽性對照的 Ct 值為 <28 並顯示一個 “S”-成形擴增曲線, 陰性對照無Ct值或Ct值≥35且無 “S”-成形擴增曲線, 實驗結果有效. 否則, 應該重複實驗, 如果重複實驗仍然無效, 請聯絡廠商技術人員.
4.2 VIC/HEX 通道中樣品的 Ct 值應≤30，並顯示 “S”-成形擴增曲線, 顯示樣本萃取和擴增有效. 如果沒有 Ct 值或有 Ct 值 30 < CT≤ 35 在VIC/HEX頻道, 顯示樣本核酸萃取不達標或存在強烈抑制干擾 (例如酒精或消毒劑的殘留物, 抗凝血劑, ETC。) 抑制放大. 建議對樣本進行後處理，進行核酸萃取和擴增.
4.3 VIC/HEX通道偵測有效後, FAM頻道中的判定流程如下:
- CT值≤ 30 和 “S”-觀察到形狀的擴增曲線, 且兩個通道之間的 Ct 差異小於 5, 確定CHD-W基因陽性, 表示樣本來自女性.
- CT值≤ 30 和 “S”-觀察到形狀的擴增曲線, 但兩個通道之間的Ct差≥ 5, 或 Ct 值為 30 < CT < 32, 所有人都被視為可疑, 建議重新測試 (建議先排除 “假陽性” 環境氣溶膠污染造成的結果, 然後進行核酸萃取和檢測). 如果排除氣溶膠污染後在 FAM 通道中重新測試顯示 Ct 值 < 30 和清晰的擴增曲線, 且兩個通道之間的 Ct 差異小於 5, 確定CHD-W基因陽性; 否則, 被判定為負數.
- 無Ct值或Ct值≥ 32 和不 “S”-成形擴增曲線, 確定 CHD-W 基因陰性, 表示樣本可能來自男性.
預防措施：
1）防止污染, 實驗應嚴格分區操作. 分區之間最好有實體隔離，避免人為因素造成交叉污染. 實驗過程中穿實驗服和乳膠手套, 並在不同區域使用單獨的工具. 根據需要更換手套和實驗室外套. PCR 後, 不要立即打開蓋子. 在打開採樣之前等待充分冷卻，以盡量減少氣溶膠污染.
2）使用前將試劑完全解凍, 但避免反覆凍融. 嚴格按照試劑說明進行配製, 樣品添加, 以及其他步驟. 工作台, 離心機, 移液器, 等器具應定期使用含氯消毒劑消毒, 乙醇, 核酸污染去除劑, 或紫外線燈.
3）陰性結果不一定代表男性. 未知突變, 樣品品質差, 低濃度, 或核酸萃取中存在強抑制物質 (測試) 也可以導致 “消極的” 結果. 本試劑盒僅用於鸚鵡CHD-W基因的特異性擴增. 對於其他產品, 請諮詢廠家.
4）本產品僅供一次性使用. 請勿反覆冷凍、解凍. 僅供科學研究之用，不得用於臨床診斷或其他用途.
