CTAB法小規模植物基因組DNA萃取試劑盒

1. 試劑盒的組成

規格	50時間	100時間
貓. 不.	SN0201	SN0202
DNA萃取柱 (放)	50 (放)	100 (放)
試劑緩衝液A	30 毫升	2 × 30 毫升
試劑緩衝液C	30 毫升	2 × 30 毫升
洗滌緩衝液 1	15 毫升	2 × 15 毫升
核糖核酸酶A	1毫升	1毫升
洗脫緩衝液	20 毫升	20 毫升
使用說明書	1	1

2. 貯存

該套件應在室溫下保存 (15-25℃) 乾燥條件下可保存 12 月. DNA萃取純化柱可在陰涼乾燥的環境中保存長達 1 年. RNase A 含有防腐劑，可在室溫下運輸, 但為了長期儲存, 應保存在-20℃.

3. 試劑盒使用說明

3.1 該試劑盒旨在用於分子生物學研究目的，不應用於疾病診斷或治療.

3.2 套件中的某些成分含有刺激物; 建議採取必要的預防措施 (例如穿著防護衣和護目鏡).

3.3 使用該套件需要額外的設備，例如高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 液態氮, 氯仿, 無菌去離子水, 和EP管.

4. 試劑盒簡介

這 CTAB-基地工廠 DNA純化 試劑盒提供了一種改良的 CTAB 純化 DNA 方法, 利用可有效沉澱 DNA 的特異性結合緩衝液, 隨後透過吸附管柱收集高純度DNA.

 

此試劑盒廣泛用於植物組織和真菌, 能夠從樣本中萃取總DNA 2 小時 (包括粒線體DNA和葉綠體DNA). 萃取的DNA可直接用於下游實驗，例如 聚合酶鍊式反應, 南方印跡, 和別的.

5. 實驗原理和程序

6. 提取過程

開始實驗前的注意事項:

 

1. 試劑緩衝液 A 和 C 低溫條件下可能會沉澱. 建議加熱至65°C 5 分鐘，待沉澱溶解後使用.
2. 洗緩衝 1 應依照瓶子標籤上的指示添加指定量的無水乙醇. 加入乙醇後標記標籤.
3. 洗脫緩衝液是 0.1x TE 解決方案含有極少量的 EDTA. EDTA是否影響後續實驗, 建議使用無菌去離子水代替洗脫緩衝液.

 

1. 樣品處理:
2. 材料收集和儲存:

新鮮收集的材料, 如果不立即使用, 應置於液態氮中並最終儲存於-80°C. 乾燥後的物料可在室溫下保存.

1. 如果可能的話, 收集新鮮材料，因為它含有較少的多醣和多酚.
2. 從液體培養物中收集真菌時, 離心分離液體並收集真菌體.
3. 磨周圍 100 mg 新鮮樣品或不超過 20 使用液態氮乾燥材料的毫克數.

(筆記: 不同的樣品量可能需要在使用前透過初步實驗進行最佳化.)

3. 添加 550 µl 試劑緩衝液 A 和 10 µl RNase A (10 毫克/毫升) 確保研磨樣本中沒有組織團塊. 組織團塊難以裂解並會降低 DNA 產量. 請勿混合 試劑緩衝液 A 和 RNase A使用前.
4. 65°C 下孵育 20-30 分分鐘, 輕輕翻轉 2-3 次. 此步驟用於細胞裂解.
5. 將裂解液離心 5 分鐘在 14,000 轉速 (20,000×g).

(筆記: 有些植物材料在這一步驟可能會有許多黏性物質, 可以在後續步驟中剪切 DNA. 理想情況下, 離心後將上清液轉移至新的離心管中以去除這些物質.)

6. 小心地將上一步所得的液體轉移至新的離心管中.

(筆記: 大約 500 可轉移μl液體; 對於某些物種, 它可能小於 500 微升.)

7. 在裂解液中加入等體積的氯仿，輕輕顛倒混勻.

(筆記: 例如, 添加 500 µl 氯仿（如果有） 500 µl 裂解液. 如果裂解液體積小於 500 微升, 相應調整氯仿體積.)

8. 離心機在 12,000 轉速為 10 分分鐘.
9. 小心地將上清液轉移至新的離心管中 (大約 500 微升).
10. 加入等體積的 試劑緩衝液C 和與裂解液等體積的無水乙醇, 並混合.

(例如, 如果你添加 450 µl 試劑緩衝液 C, 然後加 450 微升無水乙醇. 如果裂解液體積小於 450 微升, 比例減少試劑緩衝液 C 的量. 加入試劑緩衝液C後會出現一些沉澱, 但不影響後續實驗.)

11. 將所得的液體轉移至DNA純化柱 (成套工具), 大約 650-700 每次μl. 離心機超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄收集的廢棄物, 並將收集管重新插入純化管柱進行下一步.
12. 重複步驟 11, 將剩餘液體加入 DNA 純化管柱中 (成套工具) 並在超過 8,000 轉速為 1 分分鐘. 丟棄廢棄物和收集管.
13. 放置 DNA 純化柱 (成套工具) 放入新的收集管中, 添加 300 微升的 洗 緩衝 1, 離心機超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢棄物, 並重新插入DNA純化管柱 (成套工具) 進入管中進行下一步.

(筆記: 確保已添加無水乙醇 洗 緩衝 1.)

14. 添加 500 µl 沖洗緩衝液 1 至 DNA 純化柱 (成套工具), 離心機在 14,000 轉速 (20,000×g) 為了 2 分分鐘, 稍微延長離心時間以獲得乾燥的膜.
15. 放置 DNA 純化柱 (成套工具) 放入新的離心管中, 打開, 並在 65°C 下加熱 2 分分鐘. 此步驟可延長，盡可能蒸發乙醇，防止殘留乙醇影響下游實驗.
16. 滴 100 µl 洗脫緩衝液到膜上, 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘.

(筆記: 1. 洗脫 DNA 50 µl 洗脫緩衝液可增加 DNA 濃度，但會降低總 DNA 產量. 2. 洗脫液可重新上樣至 DNA 純化管柱進行第二次洗脫, 離心機在 12,000 轉速為 2 分鐘收集, 這可能會提高 DNA 產量.)