1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์
| ข้อมูลจำเพาะ | 50ต | 100ต |
| แมว. เลขที่. | SN0241 | SN0242 |
| คอลัมน์สกัดดีเอ็นเอ (ชุด) | 50 (ชุด) | 100 (ชุด) |
| น้ำยากำจัดกรดฮิวมิกฉัน | 50มล | 2x50ml |
| รีเอเจนต์การกำจัดกรดฮิวมิก II | 50มล | 2x50ml |
| บัฟเฟอร์รีเอเจนต์ⅳ | 30 มล | 2×30 มล |
| สารรีเอเจนต์บัฟเฟอร์ C Plus | 30 มล | 2×30 มล |
| บัฟเฟอร์กำจัดสารยับยั้ง | 30มล | 2x30ml |
| ไลโซไซม์ | 1มล | 2x1มล |
| โปรตีนเค | 1มล | 2x1มล |
| อาร์เนส เอ | 1มล | 2x1มล |
| ล้างบัฟเฟอร์ 1 | 15 มล | 2 × 15 มล |
| บัฟเฟอร์การชะล้าง | 20 มล | 2 ×20 มล |
| คู่มือการใช้งาน | 1 | 1 |
2. พื้นที่จัดเก็บ
ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) และในสภาวะแห้ง, มีอายุการเก็บรักษาที่ 12 เดือน. คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จากการสกัด DNA สามารถเก็บไว้ได้ 1 ปีในสภาพแวดล้อมที่เย็นและแห้ง. ไลโซไซม์, โปรตีนเค, และ อาร์เนส เอ มีสารกันบูด, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, ควรเก็บไว้ที่ -20 ℃.
3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์
3.1 ชุดรีเอเจนต์นี้มีไว้สำหรับการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.
3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดรีเอเจนต์มีสารระคายเคือง. แนะนำให้ใช้มาตรการป้องกัน เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา.
3.3 ระหว่างการใช้งานชุดรีเอเจนต์นี้, เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และผู้ใช้ต้องเตรียมท่อ EP.
4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์
ชุดนี้ให้วิธีการที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพในการชำระดีเอ็นเอจีโนมจีโนมจีโนมจากดิน, อุจจาระ, และตัวอย่างอาเจียน. ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการสกัดดีเอ็นเอจุลินทรีย์จากดิน, อุจจาระ, และอาเจียน.
ชุดนี้จะกำจัดสิ่งสกปรกและสารยับยั้งได้อย่างมีประสิทธิภาพ, ลดปฏิกิริยาการยับยั้งในการทดลองดาวน์สตรีมเช่น พีซีอาร์. กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ทั้งหมดไม่จำเป็นต้องใช้รีเอเจนต์ที่เป็นพิษเช่นฟีนอลคลอโรฟอร์ม. DNA ที่สกัดได้สามารถใช้โดยตรงสำหรับ PCR, การซับใต้, และแอพพลิเคชั่นอื่น ๆ.
5. หลักและวิธีการทดลอง
6. กระบวนการสกัด
ก่อนเริ่มการทดลอง:
ก. บัฟเฟอร์รีเอเจนต์ IV อาจตกตะกอนภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ. เราขอแนะนำให้ร้อนที่ 65 ℃สำหรับ 5 นาที. หลังจากการตกตะกอนละลาย, สามารถใช้งานได้ตามปกติ.
บี. ก่อนใช้งาน, เพิ่มจำนวนเอทานอลที่ปราศจากน้ำ ล้างบัฟเฟอร์ 1 ตามที่ระบุไว้บนฉลากขวด. ทำเครื่องหมายตรวจสอบฉลากเพื่อระบุการเพิ่มเอทานอลที่ปราศจากน้ำ.
ค. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE มี EDTA จำนวนน้อยที่สุด. หาก EDTA อาจส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, ขอแนะนำให้ทดแทนบัฟเฟอร์การกำจัดด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ผ่านการฆ่าเชื้อ.
- การประมวลผลตัวอย่าง (การกำจัดสารยับยั้ง):
ก. ตัวอย่างอุจจาระและอาเจียน: เพิ่มตัวอย่างประมาณ 200 มก., เพิ่ม 1ML ของ Humic Acid Reagent Reagent I, กระแสน้ำวนอย่างละเอียดสำหรับ 1-2 นาที, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน, เพิ่ม 560μlของบัฟเฟอร์ IV ไปที่เม็ด, กลับและผสมให้ละเอียด, ย่อยที่ 85 ℃สำหรับ 5 นาที, พลิกกลับและผสม 6-7 ครั้งในระหว่างการย่อยอาหาร, จากนั้นไปที่ ขั้นตอน 2.
บี. ตัวอย่างดิน: มีน้ำหนักประมาณ 0.1 กรัม-0.5G ของดินที่กรอง, เพิ่ม 500μlของบัฟเฟอร์ IV และ100μlของรีเอเจนต์การกำจัดกรดฮิวมิก, กลับและผสมให้ละเอียด, ย่อยที่ 85 ℃สำหรับ 5 นาที, พลิกกลับและผสม 6-7 ครั้งในระหว่างการย่อยอาหาร, จากนั้นไปที่ ขั้นตอน 2.
(บันทึก: รีเอเจนต์การกำจัดกรดฮิวมิก I/HUMIC ACID REAGENT II ส่วนใหญ่ใช้สำหรับดินที่มีปริมาณกรดฮิวมิกสูง, เช่นดินป่าและดินตะกอน. เพิ่ม 1ML ของ Humic Acid Reagent Reagent I ไปที่ตัวอย่าง, กระแสน้ำวน, เขย่า 1-2 นาที, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน, จากนั้นเพิ่ม 1มิลลิวินาทีของการกำจัดกรดฮิวมิกรีเอเจนต์ II, กระแสน้ำวน, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน. ขั้นตอนนี้สามารถลดสารยับยั้งกรดฮิวมิกในดินได้ต่อไป แต่ลดผลผลิตดีเอ็นเอลงอย่างมาก.)
- เครื่องปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, ถ่ายโอน supernatant ไปยังหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยงใหม่ (การถ่ายโอนของเหลวประมาณ500μL), เพิ่ม20μl protease K (10 มก./มล), 20μl lysozyme, และ20μl RNase A, และบ่มที่ 65 ℃สำหรับ 2 นาที.
- เพิ่มปริมาณที่เท่ากันของ รีเอเจนต์ บัฟเฟอร์ C Plus (การถ่ายโอนของเหลวประมาณ560μL) ถึงไลซีน, ผสมให้เข้ากัน. หากมีการตกตะกอนสีขาวปรากฏขึ้น, ปล่อยให้มันชำระ; มันจะไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองที่ตามมาหลังจากการตกตะกอนหายไป.
- เพิ่มเอทานอลในปริมาณที่เท่ากัน รีเอเจนต์ บัฟเฟอร์ C Plus (เช่น., เพิ่ม 560ไมโครลิตรของ รีเอเจนต์ บัฟเฟอร์ C Plus, จากนั้นเพิ่มเอทานอล560μl), ผสมให้เข้ากัน. อาจมีการเร่งรัด, แต่มันจะไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองครั้งต่อไป.
- เพิ่มของเหลวที่ได้รับไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์การสกัดดีเอ็นเอ (ปลอกหุ้ม) (ประมาณ650-700μlในแต่ละครั้ง), ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเหลวที่เก็บรวบรวมไว้, และใส่เข้าไปในคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเออีกครั้ง (ปลอกหุ้ม) สำหรับขั้นตอนต่อไป.
- เพิ่ม 400บัฟเฟอร์การกำจัดสารยับยั้งμl, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเสียของเสีย, และแทรกซึมอีกครั้ง การทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ คอลัมน์ลงในแขนเสื้อสำหรับขั้นตอนต่อไป.
- เพิ่ม 500μlล้างบัฟเฟอร์ 1 ไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอ (ปลอกหุ้ม), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาที (20,000×ก) สำหรับ 1 นาที.
- เพิ่ม 300μlล้างบัฟเฟอร์ 1 อีกครั้งในคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์การสกัดดีเอ็นเอ (ปลอกหุ้ม), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาที (20,000×ก) สำหรับ 2 นาที.
- วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (ปลอกหุ้ม) ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงใหม่, เปิดฝา, และบ่มที่ 65 ℃สำหรับ 2 นาที. ขั้นตอนนี้สามารถขยายได้หากจำเป็นเพื่อระเหยเอทานอลให้มากที่สุดเพื่อป้องกันไม่ให้เอทานอลตกค้าง.
- หยด 100μl elution buffer ลงบนเมมเบรน, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที.
(บันทึก: 1. การขจัด DNA ที่มีบัฟเฟอร์การกำจัด50μlสามารถเพิ่มความเข้มข้นของ DNA แต่ลดผลผลิต DNA ทั้งหมด; 2. ดีเอ็นเอที่ไหลออกสามารถนำไปใช้กับคอลัมน์การล้าง DNA, หมุนเหวี่ยงอีกครั้งที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, และรวบรวมเพื่อเพิ่มผลผลิตดีเอ็นเอ.)
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์