1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์
| ข้อมูลจำเพาะ | 50ต | 100ต |
| แมว. เลขที่. | SN0253 | SN0254 |
| คอลัมน์สกัดดีเอ็นเอ (ชุด) | 50 (ชุด) | 100 (ชุด) |
| Reagent Buffer SP | 20 มล | 2 × 20 มล |
| รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ C | 30 มล | 2 × 30มล |
| ล้างบัฟเฟอร์ 1 | 15 มล | 2 × 15 มล |
| บัฟเฟอร์การชะล้าง | 20 มล | 20 มล |
| โปรตีนเค | 1มล | 2x1มล |
| อาร์เนสเอ | 1มล | 2x1มล |
| คู่มือการใช้งาน | 1 | 1 |
2. พื้นที่จัดเก็บ
ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) และในสภาวะแห้ง, มีอายุการเก็บรักษาที่ 12 เดือน. คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จากการสกัด DNA สามารถเก็บไว้ได้ 1 ปีในสภาพแวดล้อมที่เย็นและแห้ง. โปรตีน K และ อาร์เนส เอ มีสารกันบูด, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, ควรเก็บไว้ที่ -20 ℃.
3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์
3.1 ชุดรีเอเจนต์นี้มีไว้สำหรับการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.
3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดรีเอเจนต์มีสารระคายเคือง. แนะนำให้ใช้มาตรการป้องกัน เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา.
3.3 ระหว่างการใช้งานชุดรีเอเจนต์นี้, เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และผู้ใช้ต้องเตรียมท่อ EP.
4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์
The sperm sample genomic DNA extraction kit provides a rapid and efficient purification solution for sperm sample DNA. It achieves sample การทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ effectively through a dedicated extraction buffer system combined with specific nucleic acid purification columns.
This kit can extract sperm sample DNA within 30 นาที, and the entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. DNA ที่สกัดออกมาสามารถนำมาใช้ได้โดยตรง พีซีอาร์, การซับใต้, และแอพพลิเคชั่นอื่น ๆ.
5. หลักและวิธีการทดลอง
6. กระบวนการสกัด
ก่อนเริ่มการทดลอง:
ก.Reagent Buffer SP:This buffer should be stored long-term in an environment between 2℃ and 8℃
บี.รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ C อาจตกตะกอนภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ. แนะนำให้ตั้งอุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 5 นาที. หลังจากการตกตะกอนละลาย, สามารถใช้งานได้ตามปกติ.
ค.ล้างบัฟเฟอร์ 1: ก่อนใช้งาน, เติมเอทานอลแอนไฮดรัสตามจำนวนที่ระบุตามที่ระบุไว้บนฉลากขวดรีเอเจนต์. ทำเครื่องหมายตรวจสอบฉลากเพื่อระบุการเพิ่มเอทานอลที่ปราศจากน้ำ.
ดี. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE containing a minimal amount of EDTA. หาก EDTA มีผลกระทบต่อการทดลองครั้งต่อไป, ขอแนะนำให้ใช้น้ำที่ปราศจากไอออนที่ผ่านการฆ่าเชื้อแทนแทนบัฟเฟอร์การชะ.
- การประมวลผลตัวอย่าง:
ปิเปต 200ไมโครลิตร of frozen sperm, incubate at 75℃ for 10 minutes until the sperm sample is not viscous. เครื่องปั่นแยกที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 นาที, สำลักซุปเปอร์โนแลนต์ให้มากที่สุด, and the sperm cells will sediment at the bottom of the tube.
- Add to the sediment from the previous step: 400μl Reagent Buffer SP, 20μl proteinase k (10 มก./มล), 20ไมโครลิตร RNaseA (10 มก./มล).Digest at 65℃ for 10 นาที, พลิกกลับและผสม 6-7 times during digestion until the sample is fully digested.
- เพิ่มปริมาณที่เท่ากันของ รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ C and an equal volume of anhydrous ethanol, and mix well by pipetting.
(ตัวอย่างเช่น: If you add 400μl of Reagent Buffer IV, you will need to add approximately 460μl of Reagent Buffer C and 460μl of anhydrous ethanol. A small amount of precipitation may form after adding Reagent Buffer C, but it does not affect subsequent experiments.)
- Transfer the obtained liquid to a DNA extraction purification column (cassette) (ประมาณ650-700μlในแต่ละครั้ง). Let it stand at room temperature for 2 นาที, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเหลวที่เก็บรวบรวมไว้, and re-insert the collection tube into the purification column for the next step.
- ทำซ้ำขั้นตอน 4, adding the remaining liquid to the DNA extraction purification column (cassette), ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, discard the waste liquid and the collection tube.
- วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (cassette) into the collection tube, เพิ่ม 300 μl ของ Wash Buffer 1, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเสียของเสีย, and place the DNA extraction purification column (cassette) back into the tube for the next step.
(บันทึก: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)
- เพิ่ม 500μl ของ Wash Buffer 1 ไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอ (cassette), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาที (20,000×ก) สำหรับ 2 นาที, extend the centrifugation time appropriately to dry the membrane more thoroughly.
- วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (cassette) ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงใหม่, เปิดฝา, incubate at 65℃for 2 นาที. Extend this step if necessary to evaporate ethanol as much as possible, preventing ethanol residue from affecting downstream experiments.
- Drop-suspend 50-100μl ของบัฟเฟอร์การชะล้าง ลงบนเมมเบรน, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที.
(บันทึก: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but decreases the overall DNA yield. 2. ดีเอ็นเอที่ไหลออกสามารถนำไปใช้กับคอลัมน์การล้าง DNA, centrifuged at 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 minutes again, to increase DNA yield.)
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์