โซลาบิโอ ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H2O2) ชุดทดสอบเนื้อหา

คุณลักษณะ	รายละเอียด
บันทึก	ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ
เครื่องมือตรวจจับ	สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ / เครื่องอ่านไมโครเพลท
หมายเลขแมว	BC3595
ขนาด	100ที/96ส

ส่วนประกอบ:

รีเอเจนต์ I: อะซิโตน 100 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃. (รีเอเจนต์ที่จัดหาเอง)

รีเอเจนต์ Ⅱ: ผง×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃. วิธีแก้ปัญหาการทำงาน: เติมกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 3 มล (37%) ก่อนใช้งาน, ละลายหมด. รีเอเจนต์ที่ไม่ได้ใช้เก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส.

รีเอเจนต์ Ⅲ: 6มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รีเอเจนต์ Ⅳ: 30มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

มาตรฐาน: 1มล.×1, 1สารละลายมาตรฐาน mmol/mL H2O2. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รายละเอียดสินค้า:

H2O2 เป็นโมเลกุลออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยาที่พบมากที่สุดในสิ่งมีชีวิต. ส่วนใหญ่ผลิตโดยการเร่งปฏิกิริยาของ SOD และ XOD และถูกย่อยสลายโดยการเร่งปฏิกิริยาของ CAT และ POD. H2O2, ซึ่งไม่ได้เป็นเพียงออกซิเจนปฏิกิริยาที่สำคัญอย่างหนึ่งเท่านั้น, แต่ยังเป็นศูนย์กลางของการแปลงออกซิเจนปฏิกิริยาร่วมกันอีกด้วย. ในด้านหนึ่ง, H2O2 สามารถออกซิไดซ์กรดนิวคลีอิกในเซลล์ได้โดยตรงหรือโดยอ้อม, โปรตีนและโมเลกุลขนาดใหญ่ทางชีวภาพอื่นๆ, และทำลายเยื่อหุ้มเซลล์, จึงเร่งการแก่และสลายตัวของเซลล์. ในทางกลับกัน, H2O2 ยังเป็นปัจจัยหลักในการควบคุมปฏิกิริยาฉุกเฉินแบบออกซิเดชั่นหลายชนิด.

H2O2 และไทเทเนียมซัลเฟตสร้างสารเชิงซ้อนไทเทเนียมเปอร์ออกไซด์สีเหลืองโดยมีคุณสมบัติการดูดซับที่ 415 นาโนเมตร.

รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้.

เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลท, เครื่องหมุนเหวี่ยงบนโต๊ะ, ปิเปตแบบปรับได้, คิวเวทท์แก้วไมโคร/แผ่นก้นแบน 96 หลุม, ปิเปตโอน, อะซิโตนกรดซัลฟิวริกเข้มข้น (37% เอชซีแอล), ครกและน้ำแข็ง.

ขั้นตอน:

ฉัน. การสกัดตัวอย่าง:

1. 1. ตัวอย่างแบคทีเรียหรือเซลล์: เก็บตัวอย่างแบคทีเรียหรือเซลล์เพื่อปั่นแยก, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน; แนะนำ 5 ล้านด้วยรีเจนท์ I 1 มล, แยกแบคทีเรียและเซลล์ด้วยอัลตราโซนิก (พลัง 20%, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 10 วินาที, สำหรับ 30 ครั้ง); เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 8000 กรัม และ 4 ℃ สำหรับ 10 นาที, ส่วนเหนือตะกอนจะถูกวางบนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.
   2. เนื้อเยื่อ: เพิ่มเนื้อเยื่อ 0.1 กรัม 1 มล. รีเจนท์ 1, บดน้ำแข็งจนสุด. เครื่องปั่นแยกที่, 8000ก. และ 4 ℃สำหรับ 10 นาที, ส่วนเหนือตะกอนจะถูกวางบนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.
   3. เซรั่ม: ตามสัดส่วนต่อ100μLของซีรั่ม (พลาสมา) เพิ่มรีเจนท์ I 0.9 มล, ผสมให้เข้ากัน. ปั่นเหวี่ยงที่ 8000 กรัม และ 4°C เพื่อ 10 นาที, ส่วนเหนือตะกอนจะถูกวางบนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.

ครั้งที่สอง. การกำหนด ขั้นตอน:

• เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลทสำหรับ 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 415 นาโนเมตร, ตั้งศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
• โซลูชั่นบ่มเพาะ Ⅱ, Ⅲ และ Ⅳ ที่ 37°C(สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม) หรือ 25 ℃ (สัตว์อื่น ๆ) อาบน้ำนานกว่า 10 นาที นาที.
• โซลูชั่นการทำงานมาตรฐาน: หากใช้จาน 96 หลุม, เจือจางสารละลายมาตรฐาน 1 มิลลิโมล/มิลลิลิตรให้เป็นสารละลายมาตรฐาน 2 ไมโครโมล/มิลลิลิตรด้วยอะซิโตน, และใช้วิธีการวัดสีแก้วติดตามเพื่อเจือจางสารละลายมาตรฐาน 1 มิลลิโมล/มล. ให้เป็นสารละลายมาตรฐาน 1 ไมโครโมล/มล.
• เพิ่มรีเอเจนต์ตามรายการต่อไปนี้ (ปฏิกิริยาในหลอด EP):

รีเอเจนต์ (ไมโครลิตร)	หลอดทดลอง (ที่)	ท่อมาตรฐาน (เช่น)	หลอดควบคุม (เครื่องปรับอากาศ)
ตัวอย่าง	250
โซลูชั่นการทำงานมาตรฐาน		250
รีเจนท์ 1			250
รีเจนท์ที่ 2	25	25	25
รีเจนท์ที่ 3	50	50	50
4000ก, เครื่องหมุนเหวี่ยงอุณหภูมิห้องสำหรับ 10 นาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน.
รีเจนท์ที่ 4	250	250	250

เติม Regent Ⅳ เพื่อละลายตะกอน (ขั้นตอนสามารถขจัดเม็ดสีผักด้วยอะซิโตนได้ 3-5 ครั้ง), และวางไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที, โอนย้าย 200 ไมโครลิตรลงในคิวเวตต์แก้วขนาดเล็กหรือเพลต 96 หลุม แล้ววัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 415 นาโนเมตร. ต้องทดสอบท่อควบคุมเพียงครั้งเดียวหรือสองครั้งเท่านั้น. คำนวณ ∆AT = AT-AC, ∆AS=AS-AC.

สาม. การคำนวณ (สำหรับไมโครเพลท ผู้อ่าน)

ก. 96-ดี จาน

• จำนวนเซลล์

H2O2(ไมโครโมล /104 เซลล์) = ∆AT۞(∆AS۞C)×Vs۞(500×Vs۞Ve)=0.004 × ∆AT ∆AS

• น้ำหนักตัวอย่าง

H2O2(ไมโครโมล/กรัม)= ∆AT۞(∆AS۞C)×V1۞(เทียบกับ۞Ve×W)= 2×∆AT ۞ ∆AS ۞W

• ความเข้มข้นของโปรตีน

H2O2(ไมโครโมล/มิลลิกรัมโปรต)= ∆ที่ ۞(∆AS۞C)×Vs۞(ซีพีอาร์×เทียบกับ)= 2×∆AT۞ ∆AS ۞ Cpr

• เซรั่ม (พลาสมา)ปริมาณ

H2O2(ไมโครโมล/มล)= ∆ที่ ۞(∆AS۞C)×10=20 × ∆AT۞∆AS

500: จำนวนเซลล์หรือแบคทีเรีย, 104;

ค: ความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน H2O2, 2ไมโครโมล/มล;

เทียบกับ: ปริมาณตัวอย่าง, 0.25 มล; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, ก;

เวอ: ปริมาณการสกัด, 1 มล;

ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล;

10: เซรั่มเจือจางหลายเท่า. [0.1มล. เซรั่ม (พลาสมา)+0.9มล. รีเจนท์ 1]۞0.1มล. เซรั่ม(พลาสมา)=10.

บี. แก้วไมโคร คิวเวทท์:

เปลี่ยนความเข้มข้นของ C-2μmol/mL มาตรฐานในสูตรข้างต้นเป็น C-1μmol/mL เพื่อการคำนวณ.

บันทึก:

1. เป็นโซลูชั่น, ฉันมีความผันผวนได้ง่าย, วิธีแก้ปัญหา ฉันจะต้องทำให้เย็นก่อนใช้งาน. เวลาบดจะต้องบดบนน้ำแข็ง.
2. สารละลายในชุดอุปกรณ์นี้มีความผันผวนได้ง่าย. กรุณานำถุงมือและหน้ากากอนามัยแบบใช้แล้วทิ้งมาด้วย.
3. หากค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างมากกว่า 1.1, ขอแนะนำให้เจือจางตัวอย่างด้วย Reagent I ก่อนทำการวัด.

ตัวอย่างการทดลอง:

1. เอา 0.1 G แห่งหัวใจและเพิ่ม 1 ML ของ Reagent I สำหรับการประมวลผลตัวอย่าง. หลังจากการหมุนเหวี่ยงเพื่อใช้ supernatant ทั้งหมด, ดำเนินการตามขั้นตอนการตัดสินใจ. หลังจากตัดสินใจด้วย 96 จานแบนดี, คำนวณ ∆AT = AT-AC = 0.083-0.046 = 0.039, ∆AS = AS-AC = 0.824-0.046 = 0.778. เนื้อหาถูกคำนวณตามมวลตัวอย่าง.

H2O2(ไมโครโมล/กรัม) = 2 × ∆AT ÷ ∆AS ÷ W = 1 μmol/g.

2. เอา 0.1 G ของชาและเพิ่ม 1 ML ของ Reagent I สำหรับการประมวลผลตัวอย่าง. หลังจากการหมุนเหวี่ยงเพื่อใช้ supernatant ทั้งหมด, ดำเนินการตามขั้นตอนการตัดสินใจ. หลังจากตัดสินใจด้วย 96 จานแบนดี, คำนวณ ∆AT = AT-AC = 0.258-0.003 = 0.255, ∆AS = AS-AC = 0.637-0.003 = 0.634. เนื้อหาถูกคำนวณตามมวลตัวอย่าง.

H2O2(ไมโครโมล/กรัม) = 2 × ∆AT ÷ ∆AS ÷ W = 4.5 μmol/g.

อ้างอิง：

• Satterfield C N, Bonnell การรบกวนในวิธีไทเทเนียมซัลเฟตสำหรับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์[เจ].

เคมีวิเคราะห์, 1955, 27(7): 1174-1175.

• Amin v M, Olson N F. การหาค่าสเปกโตรโฟโตเมตริกของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในนม[เจ]. วารสารวิทยาศาสตร์โคนม, 1967, 50(4):461-464.
• สีมา วาย เอช, เหยา เจ เอ็ม, ฮู วาย ส, และคณะ. ความแปรผันของการแสดงออกของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์และตัวเร่งปฏิกิริยาในไข่ Bombyx ระหว่างการเริ่มต้นและสิ้นสุดการหยุดชั่วคราว[เจ]. หอจดหมายเหตุชีวเคมีและสรีรวิทยาแมลง, 2011, 77(2): 72-80.

สินค้าที่เกี่ยวข้อง:

BC0020/BC0025 มาลอนไดอัลดีไฮด์(ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ) ชุดทดสอบเนื้อหา

BC1090/BC1095 แซนทีนออกซิเดส(XOD) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC0690/BC0695 กลูโคสออกซิเดส(พระเจ้า) ชุดทดสอบกิจกรรม

ข้อกำหนดทางเทคนิค:

ขีดจำกัดของการตรวจจับ ：0.0027 ไมโครโมล/มล

ช่วงเชิงเส้น：0.0195-3 ไมโครโมล/มล