Hepatic lipase (HL) ชุดทดสอบกิจกรรม
บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.
อุปกรณ์การดำเนินงาน: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์
หมายเลขแมว: BC2380
ขนาด:50ที/24ส
ส่วนประกอบ:
รีเอเจนต์ I: 100 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รีเอเจนต์ II: 3 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รีเอเจนต์ III: ผง×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃. ก่อนใช้งาน, เพิ่ม 30 มิลลิลิตรของน้ำกลั่น, fully dissolve.
รีเอเจนต์ IV: ผง×2. การจัดเก็บที่ -20 ℃. ก่อนใช้งาน, เพิ่ม 2 mL of distilled water to the one, fully dissolve. The dissolved reagent can be stored at -20 °C after repacking. Avoid repeated freeze-thaw cycles;
มาตรฐาน: ผง×1. ก่อนใช้งาน, 6.94 mL of acetone is added to prepare a 10 μmol/mL α-naphthol
โซลูชันมาตรฐาน, which was fully dissolved before use.
รายละเอียดสินค้า:
Hepatic lipase (HL) is a lipolytic enzyme synthesized in liver parenchymal cells. It is present on the surface of the liver sinusoidal endothelial cells and the surface of the hepatocyte microvilli in the sinusoidal space, and can hydrolyze various lipoproteins. The triglycerides (ทีจี) and phospholipids (PL) in the medium change the size and density of various lipoprotein particles. When the HL and its activity in the plasma increasing, it can lead to low density lipoprotein (LDL) levels in the plasma, increase and accelerate the occurrence and development of atherosclerosis.
HL hydrolyzes α-naphthyl acetate to produce α-naphthol, which can form a purple-red azo compound with fast blue B salt. It has a characteristic absorption peak at 595 นาโนเมตร, and its color depth is positively correlated with liver esterase activity within a certain range.
รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:
สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, อ่างอาบน้ำ, สมดุล, เครื่องหมุนเหวี่ยง, adjustable transferpettor, 1 คิวเวตต์แก้วขนาดมล, ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, ultrasonic crusher, น้ำแข็งและน้ำกลั่น.
ขั้นตอน:
ฉัน. เอนไซม์ extraction
- เนื้อเยื่อ
According to the tissue mass (ก): the volume of Reagent I (มล) เป็น 1:5~10 to extract. It is recommended to add 1 mL of Reagent I to 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อ, and fully homogenize on ice bath. Centrifuge at 10000g for 10 นาทีที่ 4 ℃ เพื่อขจัดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ, และนำส่วนเหนือตะกอนไปบนน้ำแข็งก่อนทำการทดสอบ.
- แบคทีเรียหรือเซลล์
According to the bacteria or cells (104): the volume of Reagent I (มล) คือ 500 ~ 1,000:1. It is recommended to add 1 mL of Reagent I to 5 แบคทีเรียหรือเซลล์ล้านล้าน. ใช้ ultrasonication เพื่อแยกแบคทีเรียและเซลล์ (วางบนน้ำแข็ง, ultrasonic power 300W, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 7 วินาที, เวลาทั้งหมด 3 นาที). เครื่องปั่นแยกที่, 10000กรัมสำหรับ 10 นาทีที่ 4 ℃เพื่อกำจัดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำและใช้ supernatant บนน้ำแข็งก่อนทดสอบ.
- Culture medium or other liquid: ตรวจจับได้โดยตรง.
ครั้งที่สอง. การตรวจจับ
- Preheat spectrophotometer for 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 595 นาโนเมตร, ตั้งศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
- Preheat reagent III at 30℃ for more than 20 นาที.
- มาตรฐาน: Dilute the 10μmol/mL standard solution to 1.25, 0.625, 0.3125, 0.15625, 0.078μmol/mL with reagent I.
- Add the following reagents in 1.5 mL EP tubes:
| Contrast tube (ค) | หลอดทดลอง (ต) | หลอดมาตรฐาน (ส) | หลอดเปล่า (บี) | |
| ตัวอย่าง (ไมโครลิตร) | 100 | 100 | – | – |
| โซลูชั่นมาตรฐาน (ไมโครลิตร) | – | – | 100 | – |
| รีเอเจนต์ I (ไมโครลิตร) | 450 | 400 | 400 | 500 |
| รีเอเจนต์ II (ไมโครลิตร) | – | 50 | 50 | 50 |
| Mix and react for 10 min at 30℃ | – | – | ||
| รีเอเจนต์ III (ไมโครลิตร) | 400 | 400 | 400 | 400 |
| รีเอเจนต์ IV (ไมโครลิตร) | 50 | 50 | 50 | 50 |
| Mix thoroughly and detect the absorbance at 595 นาโนเมตร, record as AC, ที่, AS and AB respectively. ΔAT=(เอที-เอซี), ΔAS=(AS-AB). A contrast tube is required for each test tube, and the standard curve need only be tested once or twice. | ||||
สาม. การคำนวณ:
1.เส้นโค้งมาตรฐาน
The concentration of standard solution as x-axis, ΔAS as y-axis, obtain the equation y=kx+b. Take ΔAT to the equation to acquire x (ไมโครโมล/มล) value.
2. การคำนวณ
- ความเข้มข้นของโปรตีนเนื้อเยื่อ
คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme that catalyzes the hydrolysis of α-naphthyl acetate to generate 1 μmol of α-naphthol every mg of protein in the reaction system per minute at 40℃.
HL Activity (U/มก)=x×Vs÷（Vs×Cpr）÷T =0.1x÷ Cpr
- น้ำหนักเนื้อเยื่อ
คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount enzyme that catalyzes the hydrolysis of α-naphthyl acetate to generate 1 μmol of α-naphthol every gram of tissue in the reaction system per minute at 40℃.
HL Activity (น้ำหนักยู/กรัม) = x×Vs÷(w × vs ÷ ve)÷T =0.0333x÷ W
- ของเหลว
คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme that catalyzes the hydrolysis of α-naphthyl acetate to generate 1 μmol of α-naphthol every milliliter of liquid sample in the reaction system per minute at 40℃.
HL Activity (ยู/มล) =x× Vs÷Vs÷T=0.1x
- แบคทีเรียหรือเซลล์เพาะเลี้ยง
คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme that catalyzes the hydrolysis of α-naphthyl acetate to generate 1 μmol of α-naphthol every 104 cells or bacteria in the reaction system per minute at 40℃.
HL Activity (U/104 เซลล์) =x× Ve÷ cell amount÷ T= 0.1x÷ cell amount
เทียบกับ: ปริมาณตัวอย่าง (มล), 0.1 มล; เวอ: สารสกัดสารละลาย, 1 มล;
ซีพีอาร์: ความเข้มข้นของโปรตีน (มก./มล); ต: เวลาเกิดปฏิกิริยา (นาที), 10 นาที;
ว: น้ำหนักตัวอย่าง, ก;
จำนวนเซลล์: 10 thousand as unit.
บันทึก:
- If the sample is animal liver, it is recommended to dilute the sample with reagent I more than 25 times before testing, and multiply the dilution factor in the calculation
- If the sample is serum or plasma from obese animals, it is recommended to dilute the sample with reagent I more than 5 times before testing, and multiply the dilution factor in the calculation
- When ΔA is greater than 0.8, it is recommended to measure the sample after diluting it with the reagent, and multiply it by the dilution factor in the calculation
ตัวอย่างการทดลอง:
- 1g rat liver was taken for sample processing, and the supernatant is diluted 24 ครั้ง, then the operation is carried out according to the operation steps. Measured and calculated by 96 จานดี: ΔA = AT-AB = 0.713-0.001=0.712, and the standard curve: y = 0.6381x – 0.0005, calculate x =1.1166
HL activity (มวลยู/กรัม) = x×VS ÷ (W×VS ÷ VST)÷ T ×48 = 53.597 มวลยู/กรัม.
- After the turkey serum was diluted 6 ครั้ง, the operation was carried out according to the operation steps. Measured and calculated by 96 จานดี: ΔA = AT-AB =0.572-0.003=0.569, and the standard curve: y = 0.6381x – 0.0005, calculate x =892
HL activity (มวลยู/กรัม) = x×VS ÷ (W×VS ÷ VST)÷ T ×12 = 1.071 มวลยู/กรัม
สินค้าที่เกี่ยวข้อง：
BC2340/BC2345 Lipase(แอลพีเอส) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC0620/BC0625 Triglyceride(ทีจี) ชุดทดสอบเนื้อหา
BC2440/BC2445 Lipoprteinlipase(LPL) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC0320/BC0325 Plant Lipoxygenase(LOX) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC0590/BC0595 Free fatty Acids(FFA) ชุดทดสอบเนื้อหา
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์