หมายเลขสินค้า：AP2308004 ข้อมูลจำเพาะ：24ที/48ต พื้นที่จัดเก็บ：-20℃
การแนะนำสินค้า：
Salmonella is a common foodborne pathogenic bacterium that can lead to salmonellosis, with eggs, สัตว์ปีก, and meat being common sources of transmission. This test kit utilizes real-time fluorescent quantitative พีซีอาร์ technology to selectively amplify specific DNA segments of Salmonella in samples such as water, อุจจาระ, and suspected contaminated food. The presence of Salmonella in the sample can be determined by the Ct value, or the contamination level of Salmonella in the sample can be determined through a standard curve.
เนื้อหาผลิตภัณฑ์：
| ส่วนประกอบรีเอเจนต์ | AP2308004-01（24T） | AP2308004-02（48T） |
| Sal Premix Solution | 11.5µL/หลุม× 8 หลุม/แถบ× 3 แถบ | 11.5µL/หลุม× 8 หลุม/แถบ× 6 แถบ |
| Sal Reaction Solution | 290ไมโครลิตร | 575ไมโครลิตร |
| Sal Positive control | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
| การควบคุมเชิงลบ | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
สภาพการเก็บรักษา：
เก็บที่อุณหภูมิ -20 ℃, อายุการเก็บรักษาเป็นอย่างน้อย 12 เดือน.
การดำเนินการทดลอง：
- การจัดเตรียมตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)
1.1 ข้อกำหนดตัวอย่าง:
– ไม้กวาดในช่องปากและในช่องปาก: ใช้สำลีปลอดเชื้อ, สอดเข้าไปในลำคอของนกหรือเสื้อคลุม, หมุนสามครั้ง, วางไว้ในหลอดหมุนเหวี่ยง, ตัดส่วนที่สัมผัสออก, ปิดฝาให้แน่น, และติดป้ายกำกับ. ตัวอย่างที่สามารถทดสอบได้ทันทีควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C ภายใน 24 ชั่วโมง, และตัวอย่างที่ไม่สามารถทดสอบได้ทันทีควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C.
– เลือดทั้งหมด: ใช้ EDTA เป็นสารกันเลือดแข็ง, หลีกเลี่ยงสารกันเลือดแข็งเฮปาริน, ใช้เลือดสดทั้งหมด, หรือเก็บที่อุณหภูมิ 2-8°C ไม่เกิน 7 วัน, หรือเก็บที่อุณหภูมิ -20°C ไม่เกิน 3 เดือน, หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ.
– เนื้อเยื่อ: รับประทานกล้ามเนื้อหรือเนื้อเยื่อสดไม่เกิน 100 มก, ใช้น้ำฆ่าเชื้อ200-500μLเพื่อเตรียมเนื้อเยื่อให้เป็นเนื้อเดียวกัน, และดำเนินการเตรียมตัวอย่างต่อไป.
1.2 การจัดเตรียมตัวอย่าง:
According to the “GB 4789.4-2016 National Food Safety Standard – Food Microbiological Examination – Salmonella Test” section 5.1 or other applicable standards, process the sample by pre-enrichment, and prepare the bacterial suspension for later use. Weigh 25g (มล) of the sample and place it in a sterile homogenization cup containing 225mL of Buffered Peptone Water (BPW). Homogenize at 8000rpm/min to 10000rpm/min for 1min to 2min or place it in a sterile homogenization bag containing 225mL of BPW and homogenize with a stomacher for 1min to 2min. If the sample is liquid, homogenization is not necessary; shake it well. If pH measurement is required, adjust the pH to 6.8±0.2 using 1mol/mL sterile NaOH or HCl.Perform aseptic operations to transfer the sample to a 500mL conical flask. If using a homogenization bag, direct cultivation can be performed. Incubate at 36°C±1°C for 8h to 18h. If the sample is a frozen product, thaw at temperatures below 45°C for no more than 15min or at 2°C to 5°C for no more than 18h.Refer to the Sanshi Biological “ดีเอ็นเอทั้งหมด/ชุดสกัด RNA คู่มือ” (แคตตาล็อก: DP201) or other nucleic acid extraction kits/methods that meet relevant requirements for nucleic acid extraction from processed samples. Place the extracted nucleic acid samples in an icebox and perform the detection as soon as possible. เก็บที่อุณหภูมิ 4°C ไม่เกิน 7 วันหรือที่อุณหภูมิ -20°C ไม่เกิน 6 เดือน.
- การเตรียมระบบปฏิกิริยา (พื้นที่ปฏิกิริยา)
2.1 นำส่วนประกอบแต่ละส่วนของชุดออกมา, ละลายอย่างสมบูรณ์ที่อุณหภูมิห้อง, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, และปั่นแยกของเหลวภายในผนังท่อและฝาท่อไปที่ด้านล่างของท่อ. เตรียมสารละลายสำหรับปฏิกิริยาตามปริมาณตัวอย่าง (n+2, โดยที่ n คือจำนวนตัวอย่าง, ขอแนะนำให้ตั้งค่า 1 การควบคุมเชิงบวกและ 1 การควบคุมเชิงลบสำหรับการทดสอบแต่ละครั้ง). วิธีการเตรียมเฉพาะ: เอา (n+2) reaction tubes containing Sal premix solution, เติมสารละลายปฏิกิริยา PiHV 11.5µL ลงในแต่ละหลอด, ใช้ปิเปตเพื่อผสมให้ละเอียด, 23µL ต่อหลุม, และเก็บในตู้เย็น.
2.2 จากนั้นเพิ่มตัวควบคุมเชิงลบ 2μL ตามลำดับ, ตัวอย่างกรดนิวคลีอิกที่สกัดได้, and Sal positive control to the reaction solution. ปิดฝาท่อ, ทำบันทึก, และปริมาตรรวมของแต่ละปฏิกิริยาคือ 25ไมโครลิตร. ผสมให้เข้ากัน, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, และทำการทดลองขยายสัญญาณด้วยเครื่องมือ PCR.
- การขยาย PCR (พื้นที่การขยายและการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์)
การเสียสภาพล่วงหน้าที่ 95°C สำหรับ 2 นาที; การเสียสภาพที่ 95°C สำหรับ 10 วินาที, การหลอมและยืดที่อุณหภูมิ 60°C สำหรับ 35 วินาที, 40 รอบ. เก็บสัญญาณเรืองแสงที่อุณหภูมิ 60°C. เลือกช่องเรืองแสง FAM (ใช้เครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงแบบเรียลไทม์ เช่น ซีรี่ส์ ABI, ในกรณีที่จำเป็น, ติดต่อผู้ผลิตหรือเพิ่มสีย้อมสำหรับแก้ไข ROX; มิฉะนั้น, ปฏิบัติตามขั้นตอนปกติ).
- การตีความผลลัพธ์
4.1 เงื่อนไขสำหรับความถูกต้องของการทดสอบ:
Positive control: Ct value in the FAM channel < 28 and the appearance of an “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง. การควบคุมเชิงลบ: ไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 40 และไม่ “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง. The experiment results are valid under these conditions; มิฉะนั้น, ทำการทดลองซ้ำ. If repeated testing is still invalid, โปรดติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคของผู้ผลิต.
4.2 การตีความผลลัพธ์ตัวอย่าง:
ค่ากะรัต ≤ 35 with an “ส”-shaped amplification curve is considered positive for Salmonella nucleic acid. ค่ากะรัตระหว่าง 35 และ 40 ถือว่าน่าสงสัย, and retesting is recommended. This may be due to substandard nucleic acid extraction or the presence of strong inhibitory substances (such as residual disinfectants, สารกันเลือดแข็ง, ฯลฯ). It is suggested to reprocess the sample for nucleic acid extraction and amplification. อันดับแรก, exclude “บวกเท็จ” results caused by aerosol contamination, then re-extract and test the nucleic acid. ถ้า, after excluding aerosol contamination, the FAM channel retest shows a Ct value < 35 ด้วยเส้นโค้งการขยายที่ชัดเจน, ก็ถือว่าเป็นบวก; มิฉะนั้น, ก็ถือว่าเป็นเชิงลบ.
ไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 40 และไม่ “ส”-shaped amplification curve is considered negative for Salmonella nucleic acid.
ข้อควรระวัง：
- เพื่อป้องกันการปนเปื้อน, การทดลองควรแบ่งพาร์ติชันอย่างเคร่งครัด, และการแยกทางกายภาพระหว่างพาร์ติชันเป็นที่ต้องการเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามเนื่องจากปัจจัยของมนุษย์. สวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือยางในระหว่างการทดลอง, ใช้เครื่องมืออย่างอิสระในด้านต่างๆ, เปลี่ยนถุงมือและเสื้อกาวน์ห้องปฏิบัติการเมื่อจำเป็น. หลังจาก PCR, อย่าเปิดฝาทันที; เปิดหลังจากเย็นเพียงพอแล้วเพื่อลดการปนเปื้อนของละอองลอย.
- ละลายรีเอเจนต์ให้หมดก่อนใช้งาน, แต่หลีกเลี่ยงการแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ. หลอดปฏิกิริยา PCR ที่ให้มาในชุดคือ 0.2 มล; หากจำเป็นต้องเปลี่ยน, ถ่ายโอนหลังจากการละลายเสร็จสมบูรณ์. ปฏิบัติตามคำแนะนำในการเตรียมรีเอเจนต์และการเติมตัวอย่างอย่างเคร่งครัด. เวิร์กสเตชัน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปต, และอุปกรณ์อื่นๆ ควรฆ่าเชื้อด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นประจำ, แอลกอฮอล์, สารชำระล้างกรดนิวคลีอิก, หรือแสงยูวี.
- ผลลัพธ์ที่เป็นลบไม่ได้หมายความว่าโฮสต์ไม่ได้ติดไวรัสเสมอไป. ตัวอย่างมีคุณภาพต่ำ, โหลดไวรัสต่ำ, หรือมีสารยับยั้งอย่างแรง (เช่นแอลกอฮอล์, ยาฆ่าเชื้อ, สารกันเลือดแข็ง, ฯลฯ) อาจส่งผลให้สกัดกรดนิวคลีอิกไม่สำเร็จ (การตรวจจับ) และก “เชิงลบ” ผลลัพธ์. ปฏิบัติตามเกณฑ์การตีความผลลัพธ์, และเมื่อมีผลลัพธ์ที่น่าสงสัย, อันดับแรก ไม่รวมการปนเปื้อนของละอองลอย. หากมีคำถามอื่นๆ, ติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคของผู้ผลิต.
- ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพียงครั้งเดียวเท่านั้น. ส่วนประกอบในรีเอเจนต์ไวต่อแสงธรรมชาติ; หลีกเลี่ยงการสัมผัสแสงระหว่างการบรรจุและการเก็บรักษา. หลังจากบรรจุภัณฑ์, อย่าแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ. สำหรับใช้ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น; ไม่ใช่เพื่อการวินิจฉัยทางคลินิกหรือเพื่อวัตถุประสงค์อื่น.
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์