หมายเลขสินค้า: AP2409002 ข้อมูลจำเพาะ: 50ต/100ต พื้นที่จัดเก็บ: -20℃
การแนะนำสินค้า:
ไวรัสเริมนกพิราบ (PiHV) เป็นโรคติดเชื้อไวรัสส่วนใหญ่ส่งผลกระทบต่อนกพิราบตัวเล็กที่เกิดจากนกพิราบ herpesvirus 1 (PIHV1). มันเป็นเชื้อโรคที่สำคัญที่นำไปสู่อาการโรคนกพิราบโรค squab ในนกพิราบตัวเล็ก. ทางคลินิก, มันมีลักษณะเป็นอาการเช่นจมูกและการอักเสบ conjunctival. นกพิราบที่ติดเชื้ออาจแสดงอาการซึมเศร้า, ความอยากอาหารลดลง, ท้องเสีย, การอาเจียน, และอาการทางระบบประสาท. ดังนั้น, แต่แรก, รวดเร็ว, และการตรวจจับ PIHV ที่สะดวกเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการวินิจฉัย, ชะลอการแพร่กระจายของโรค, และป้องกันภาวะแทรกซ้อน. ชุดทดสอบนี้ได้รับการออกแบบตามลำดับการอนุรักษ์ในยีน PIHV, ด้วยเงื่อนไขที่เหมาะสมที่สุด, ช่วยให้สามารถวัดปริมาณฟลูออเรสเซนต์ได้อย่างแม่นยำ พีซีอาร์ การทดสอบช่องปาก, ไม้กวาดปิดบัง, เลือด, และตัวอย่างเนื้อเยื่ออื่นๆ จากนก. สิ่งนี้ช่วยให้สามารถกำหนดได้อย่างรวดเร็วว่าโฮสต์ติดเชื้อ PIHV.
เนื้อหาผลิตภัณฑ์:
| ส่วนประกอบรีเอเจนต์ | AN2409002-02 (50ต) | AN2409002-03 (100ต) |
| น้ำยาทดสอบ PIHV | 1150ไมโครลิตร | 1150µl × 2 |
| การควบคุมบวก PIHV | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
| การควบคุมเชิงลบ | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
สภาพการเก็บรักษา:
เก็บที่อุณหภูมิ -20 ℃, อายุการเก็บรักษาเป็นอย่างน้อย 12 เดือน.
การดำเนินการทดลอง:
- การจัดเตรียมตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)
1.1 ข้อกำหนดตัวอย่าง:
-swab ในช่องปาก/clocal: ใช้ผ้าฝ้ายที่ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อแทรกเข้าไปในลำคอของนกหรือ cloaca, หมุนสามครั้ง. นำออกแล้ววางไว้ในหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยง, ตัดส่วนที่เปิดเผยออก, จากนั้นปิดท่ออย่างแน่นหนาและติดฉลาก. ตัวอย่างที่สามารถทดสอบได้ภายใน 24 สามารถเก็บชั่วโมงที่อุณหภูมิ 2-8 ° C; ตัวอย่างที่ไม่สามารถทดสอบได้ทันทีควรเก็บไว้ที่ -20 ° C.
-เลือดทั้งหมด: ใช้ EDTA เป็นสารกันเลือดแข็ง; อย่าใช้เฮปาริน. จำเป็นต้องมีเลือดทั้งหมด, หรือสามารถเก็บไว้ที่ 2-8 ° C ไม่เกิน 7 วัน, หรือที่ -20 ° C ไม่เกิน 3 เดือน. ควรหลีกเลี่ยงรอบการแช่แข็งซ้ำ ๆ.
-เนื้อเยื่อ: ใช้เนื้อเยื่อตับสดไม่เกิน 100 มก, และเตรียมเนื้อเยื่อ homogenate โดยใช้น้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อ200-500μLสำหรับการเตรียมตัวอย่างที่ตามมา.
1.2 การจัดเตรียมตัวอย่าง:
อ้างถึง Sanshibio's “ชุดจีโนมสัตว์ DNA อย่างรวดเร็ว (สำหรับการวิเคราะห์ PCR) คู่มือ” (แคตตาล็อกหมายเลข: DP202), หรือชุด/วิธีการสกัดกรดนิวคลีอิกอื่นๆ ที่ตรงตามข้อกำหนดที่เกี่ยวข้อง, เพื่อสกัดกรดนิวคลีอิกจากตัวอย่างประมวลผล. ควรวางตัวอย่างกรดนิวคลีอิกที่สกัดไว้ในกล่องน้ำแข็งและทดสอบโดยเร็วที่สุด; สามารถเก็บไว้ที่ 4 ° C ไม่เกิน 7 วันหรือที่อุณหภูมิ -20°C ไม่เกิน 6 เดือน.
- เตรียมระบบปฏิกิริยา (พื้นที่เพิ่มตัวอย่าง)
2.1 นำส่วนประกอบแต่ละส่วนของชุดออกมา, ละลายอย่างสมบูรณ์ที่อุณหภูมิห้อง, และเครื่องปั่นแยกเพื่อ 10 วินาทีในการรวบรวมของเหลวจากผนังหลอดและหมวกที่ด้านล่าง. เตรียมระบบปฏิกิริยาตามจำนวนตัวอย่าง (n+2) (เช่น., n ตัวอย่างทดสอบ + 1 การควบคุมเชิงบวก + 1 การควบคุมเชิงลบ). โดยเฉพาะ, เตรียมตัว (n+2) ท่อ PCR, การจ่ายน้ำรีเอเจนต์การทดสอบ PIHV 23μlในแต่ละหลอด, และเก็บไว้ในกล่องน้ำแข็งเพื่อใช้ในภายหลัง.
2.2 แล้ว, ตามลำดับเพิ่ม2μlของการควบคุมเชิงลบ, ตัวอย่างกรดนิวคลีอิกที่สกัดได้, และการควบคุมเชิงบวกของ PIHV ไปยังรีเอเจนต์การทดสอบ. ปิดท่ออย่างปลอดภัยและบันทึกข้อมูล; ปริมาตรทั้งหมดสำหรับแต่ละปฏิกิริยาควรเป็น25μl. ผสมให้เข้ากัน, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, และดำเนินการทดสอบการขยายในเครื่องมือ PCR.
- การขยาย PCR (พื้นที่การขยายและการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์)
50° C ung enzyme decontamination สำหรับ 2 นาที; 95° C ล่วงหน้าสำหรับ 2 นาที; 95° C denaturation สำหรับ 10 วินาที, ตามด้วยการหลอม 60 ° C และการขยายสำหรับ 35 วินาที, สำหรับ 40 รอบ, การรวบรวมสัญญาณเรืองแสงที่ 60 ° C. เลือก Fluorescence Channel Fam (หากใช้ซีรี่ส์ ABI หรือเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ที่คล้ายกัน, ติดต่อผู้ผลิตล่วงหน้าหากจำเป็นหรือเพิ่มสีย้อมการสอบเทียบ ROX ด้วยตัวคุณเอง; มิฉะนั้น, ปฏิบัติตามขั้นตอนปกติ).
- การกำหนดผลลัพธ์
4.1 เงื่อนไขสำหรับการตรวจสอบผลการทดลอง:
การควบคุมเชิงบวก ค่า Ct ของช่อง FAM < 28 และจัดแสดง “ส” เส้นโค้งการขยายรูปทรง; การควบคุมเชิงลบไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 38 และไม่ “ส” เส้นโค้งการขยายรูปทรง, ระบุผลลัพธ์ที่ถูกต้อง; มิฉะนั้น, ทำการทดลองซ้ำ. หากการทดสอบซ้ำยังคงไม่ถูกต้อง, โปรดติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคของผู้ผลิต.
4.2 การกำหนดผลลัพธ์ตัวอย่าง:
ค่ากะรัต ≤ 33 และจัดแสดง “ส” เส้นโค้งการขยายรูปทรง, ตัดสินว่าเป็น pihv บวก;
มูลค่ากะรัต 33 < กะรัต < 38 ถือว่าน่าสงสัย; แนะนำให้ทดสอบซ้ำ (การสกัดกรดนิวคลีอิกอาจจะต่ำกว่ามาตรฐานหรือมีสารปนเปื้อนยับยั้งที่แข็งแกร่ง (เช่น., สารตกค้างจากฆ่าเชื้อ, สารกันเลือดแข็ง) การยับยั้งการขยาย; แนะนำการประมวลผลตัวอย่างใหม่สำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิกและการขยาย; ก่อนอื่นกฎผลลัพธ์เชิงบวกที่ผิดพลาดที่เกิดจากการปนเปื้อนของละออง). หากการปนเปื้อนของละออง < 33 ด้วยเส้นโค้งการขยายที่ชัดเจน, มันถูกกำหนดเป็น pihv บวก; มิฉะนั้น, มันถูกพิจารณาว่าเป็นลบ;
ไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 38 และไม่ “ส” เส้นโค้งการขยายรูปแบบถูกกำหนดเป็นลบ PIHV.
ข้อควรระวัง:
- เพื่อป้องกันการปนเปื้อน, การทดลองควรแบ่งพาร์ติชันอย่างเคร่งครัด, และการแยกทางกายภาพระหว่างพาร์ติชันเป็นที่ต้องการเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามเนื่องจากปัจจัยของมนุษย์. สวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือยางในระหว่างการทดลอง, ใช้เครื่องมืออย่างอิสระในด้านต่างๆ, เปลี่ยนถุงมือและเสื้อกาวน์ห้องปฏิบัติการเมื่อจำเป็น. หลังจาก PCR, อย่าเปิดฝาทันที; เปิดหลังจากเย็นเพียงพอแล้วเพื่อลดการปนเปื้อนของละอองลอย.
- ละลายรีเอเจนต์ให้หมดก่อนใช้งาน, แต่หลีกเลี่ยงการแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ. หลอดปฏิกิริยา PCR ที่ให้มาในชุดคือ 0.2 มล; หากจำเป็นต้องเปลี่ยน, ถ่ายโอนหลังจากการละลายเสร็จสมบูรณ์. ปฏิบัติตามคำแนะนำในการเตรียมรีเอเจนต์และการเติมตัวอย่างอย่างเคร่งครัด. เวิร์กสเตชัน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปต, และอุปกรณ์อื่นๆ ควรฆ่าเชื้อด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นประจำ, แอลกอฮอล์, สารชำระล้างกรดนิวคลีอิก, หรือแสงยูวี.
- ผลลัพธ์ที่เป็นลบไม่ได้หมายความว่าโฮสต์ไม่ได้ติดไวรัสเสมอไป. ตัวอย่างมีคุณภาพต่ำ, โหลดไวรัสต่ำ, หรือมีสารยับยั้งอย่างแรง (เช่นแอลกอฮอล์, ยาฆ่าเชื้อ, สารกันเลือดแข็ง, ฯลฯ) อาจส่งผลให้สกัดกรดนิวคลีอิกไม่สำเร็จ (การตรวจจับ) และก “เชิงลบ” ผลลัพธ์. ปฏิบัติตามเกณฑ์การตีความผลลัพธ์, และเมื่อมีผลลัพธ์ที่น่าสงสัย, อันดับแรก ไม่รวมการปนเปื้อนของละอองลอย. หากมีคำถามอื่นๆ, ติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคของผู้ผลิต.
- ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพียงครั้งเดียวเท่านั้น. ส่วนประกอบในรีเอเจนต์ไวต่อแสงธรรมชาติ; หลีกเลี่ยงการสัมผัสแสงระหว่างการบรรจุและการเก็บรักษา. หลังจากบรรจุภัณฑ์, อย่าแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ. สำหรับใช้ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น; ไม่ใช่เพื่อการวินิจฉัยทางคลินิกหรือเพื่อวัตถุประสงค์อื่น.
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์