บันทึก: ผลิตภัณฑ์นี้จะต้องบรรจุด้วยถุงน้ำแข็งและจัดส่งผ่าน FedEx หรือ UPS.
จะมาถึงภายใน 7-10 วัน. ค่าจัดส่งรวมอยู่ในราคาสินค้าแล้ว.
การแนะนำสินค้า：
ชุดทดสอบนี้ออกแบบมาเพื่อขยายและตรวจหายีนอนุรักษ์ของ Psittacine Beak and Feather Disease Virus (PBFDV) ในกลุ่มตัวอย่างเช่นขนนก, เลือด, เนื้อเยื่อ, ไม้กวาดในช่องปาก, และไม้กวาดปิดบัง. แนะนำการอ้างอิงภายในภายนอก, ช่วยให้สามารถตรวจสอบกระบวนการสกัดและขยายกรดนิวคลีอิกได้, รับประกันความถูกต้องแม่นยำของผลการตรวจจับ.
เนื้อหาผลิตภัณฑ์：
| ส่วนประกอบรีเอเจนต์ | AP2304002-01(24T) | AP2304002-02(48T) |
| สารละลายปฏิกิริยา PBFDV | 23µL/หลุม×8หลุม/แถบ×3แถบ | 23µL/หลุม×8หลุม/แถบ×6แถบ |
| PBFDV การควบคุมเชิงบวก | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
| การควบคุมเชิงลบ | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
สภาพการเก็บรักษา：
เก็บที่อุณหภูมิ -20 ℃, อายุการเก็บรักษาเป็นอย่างน้อย 12 เดือน
การดำเนินการทดลอง：
1. การจัดเตรียมตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)
1.1 ข้อกำหนดตัวอย่าง：
ขนนก: รวบรวมขั้นต่ำของ 5 ขนออกจากหน้าอก, หน้าท้อง, หรือขา (รวมถึงส่วนก้านขนนกด้วย), และไม่ใช้ขนหลุดตามธรรมชาติ.
เลือด: ใช้ EDTA เป็นสารกันเลือดแข็ง, อย่าใช้เฮปารินเป็นสารกันเลือดแข็ง. ควรใช้เลือดครบส่วนสด, หรือสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2~8°C ได้นานถึง 7 วัน, หรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C ได้นานถึง 3 เดือน. หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ ให้มากที่สุด.
เนื้อเยื่อ: นำกล้ามเนื้อหรือเนื้อเยื่ออวัยวะสด (หลีกเลี่ยงการใช้ตัวอย่างกับผิวหนัง, เส้นเอ็น, หรือพังผืดที่ยากต่อการประมวลผล) ไม่เกิน 100 มก. เตรียมเนื้อเยื่อให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้น้ำฆ่าเชื้อ 200-500μL, แล้วจึงดำเนินการเตรียมตัวอย่างต่อไป.
1.2 การจัดเตรียมตัวอย่าง：
โปรดดูคู่มือของ Three Lions Biotech “ชุดสกัด DNA อย่างรวดเร็วของจีโนมสัตว์ (สำหรับ พีซีอาร์ การวิเคราะห์)” (หมายเลขชิ้นส่วน: DP202), หรือชุด/วิธีการสกัดกรดนิวคลีอิกอื่นๆ ที่ตรงตามข้อกำหนดที่เกี่ยวข้อง, สำหรับการสกัดตัวอย่างที่ผ่านการประมวลผล. ใส่กรดนิวคลีอิกตัวอย่างที่สกัดแล้วลงในกล่องน้ำแข็ง และพยายามดำเนินการทดสอบทันที. สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C ได้นานถึง 7 วันหรือที่อุณหภูมิ -20°C ได้นานถึง 6 เดือน.
2 . การเตรียมระบบปฏิกิริยา (พื้นที่ปฏิกิริยาสำหรับการเพิ่มตัวอย่าง).
2.1 ถอดหลอดปฏิกิริยา n+2 ออก (n แสดงถึงจำนวนตัวอย่างทดสอบ) ที่มีการควบคุมเชิงบวกของ PBFDV, การควบคุมเชิงลบ, และสารละลายปฏิกิริยา PBFDV ที่จำเป็น. ละลายรีเอเจนต์อย่างสมบูรณ์ที่อุณหภูมิห้อง, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, จากนั้นหมุนเหวี่ยงของเหลวภายในผนังท่อและปิดฝาลงไปที่ด้านล่าง. เก็บหลอดไว้ในกล่องน้ำแข็งเพื่อใช้ในภายหลัง.
2.2 เพิ่มตัวควบคุมเชิงลบ 2μL, ตัวอย่างกรดนิวคลีอิกที่สกัดได้, และการควบคุมเชิงบวกของ PBFDV ตามลำดับกับสารละลายของปฏิกิริยา. ปิดฝาท่อให้แน่น, จัดทำบันทึกที่จำเป็น, และตรวจสอบให้แน่ใจว่าแต่ละปฏิกิริยามีปริมาตรรวม 25ไมโครลิตร. ผสมเนื้อหาและเครื่องปั่นแยกให้ละเอียด 10 วินาทีก่อนที่จะทำการทดลองขยายสัญญาณบน เครื่องพีซีอาร์.
3. การขยาย PCR (พื้นที่การขยายและการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์).
กระบวนการขยาย PCR มีดังต่อไปนี้: การเสียสภาพล่วงหน้าที่ 95 ℃สำหรับ 3 นาที; การเสียสภาพที่ 95 ℃สำหรับ 10 วินาที, การหลอมและการยืดที่อุณหภูมิ 60°C สำหรับ 40 วินาที, รวมเป็น 35 รอบ. เก็บสัญญาณเรืองแสงที่ 60°C. ในการตรวจจับสารเรืองแสง, เลือก FAM สำหรับช่องแรก (สำหรับยีนเฉพาะ APV), และเลือก VIC/HEX สำหรับช่องที่สอง (สำหรับยีนอ้างอิงภายนอก). หากใช้เครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงแบบเรียลไทม์ซีรีส์ ABI, คุณสามารถติดต่อผู้ผลิตล่วงหน้าหรือเติมสีย้อมสอบเทียบ ROX ด้วยตัวเองหากจำเป็น; มิฉะนั้น, ปฏิบัติตามขั้นตอนปกติ.
4. การกำหนดผลลัพธ์
4.1 หากค่า Ct ของตัวควบคุมเชิงบวกทั้งในช่อง FAM และช่อง VIC/HEX เท่ากับ <30 และแสดงอัน “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, และกลุ่มควบคุมเชิงลบไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥35 และไม่มี “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, ผลการทดลองถูกต้อง. มิฉะนั้น, ควรทำการทดลองซ้ำ, และถ้าการทดลองซ้ำยังคงไม่ถูกต้อง, โปรดติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิค.
4.2 ค่า Ct ของตัวอย่างในช่อง VIC/HEX ควรเป็น ≤32 และแสดง “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, บ่งชี้ว่าการสกัดและขยายตัวอย่างมีประสิทธิผล. หากไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct เป็น 32 < กะรัต ≤ 35 ในช่อง VIC/HEX, บ่งชี้ว่าตัวอย่างการสกัดกรดนิวคลีอิกไม่ได้มาตรฐานหรือมีการแทรกแซงการยับยั้งอย่างรุนแรง (เช่นสารตกค้างของแอลกอฮอล์หรือยาฆ่าเชื้อ, สารกันเลือดแข็ง, ฯลฯ) ที่ขัดขวางการขยายเสียง. ขอแนะนำให้ประมวลผลตัวอย่างซ้ำเพื่อการสกัดและขยายกรดนิวคลีอิก.
4.3 หลังจากการตรวจจับในช่อง VIC/HEX ถูกต้องแล้ว, การกำหนดในช่อง FAM จะดำเนินการดังนี้:
- ค่ากะรัต ≤ 32 และ “ส”-สังเกตเส้นโค้งการขยายรูปทรง, มันถูกพิจารณาว่าเป็นผลบวกสำหรับ APV, บ่งชี้ว่ามีไวรัส APV อยู่ในตัวอย่าง.
- ค่ากะรัตคือ 32 < กะรัต < 35, ถือว่าน่าสงสัย, และควรทดสอบตัวอย่างอีกครั้ง (โดยการสกัดซ้ำและทดสอบกรดนิวคลีอิก, แนะนำให้ยกเว้นก่อน “บวกเท็จ” ผลลัพธ์ที่เกิดจากการปนเปื้อนของละอองลอยในสิ่งแวดล้อม). หากการทดสอบซ้ำในช่อง FAM หลังจากไม่รวมการปนเปื้อนของละอองลอยแล้ว แสดงค่า Ct < 35 และเส้นโค้งการขยายเสียงที่ชัดเจน, มันถูกพิจารณาว่าเป็นผลบวกสำหรับ APV; มิฉะนั้น, มันถูกพิจารณาว่าเป็นลบ.
- ไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 35 และไม่ “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, ถูกกำหนดให้เป็นลบสำหรับ APV, แสดงว่าตรวจไม่พบไวรัส APV ในตัวอย่าง.
ข้อควรระวัง：
1）เพื่อป้องกันการปนเปื้อน, การทดลองควรดำเนินการอย่างเคร่งครัดโดยแบ่งพาร์ติชัน. ควรมีการแยกทางกายภาพระหว่างพาร์ติชันเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามที่เกิดจากปัจจัยมนุษย์. สวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือยางในระหว่างการทดลอง, และใช้เครื่องมือแยกกันในด้านต่างๆ. เปลี่ยนถุงมือและเสื้อกาวน์ตามความจำเป็น. หลังจากทำ PCR, อย่าเปิดฝาทันที. รอให้เย็นเพียงพอก่อนเปิดเก็บตัวอย่างเพื่อลดการปนเปื้อนของละอองลอย.
2）ละลายรีเอเจนต์ให้หมดก่อนใช้งาน, แต่หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ. ปฏิบัติตามคำแนะนำอย่างเคร่งครัดในการเตรียมรีเอเจนต์, นอกจากนี้ตัวอย่าง, และขั้นตอนอื่นๆ. โต๊ะทำงาน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปต, และเครื่องมืออื่นๆ ควรฆ่าเชื้อด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นประจำ, เอทานอล, สารกำจัดการปนเปื้อนของกรดนิวคลีอิก, หรือโคมไฟอัลตราไวโอเลต.
3）ผลลัพธ์เชิงลบไม่ได้แปลว่าเป็นผู้ชายเสมอไป. การกลายพันธุ์ที่ไม่รู้จัก, คุณภาพตัวอย่างไม่ดี, ความเข้มข้นต่ำ, หรือการมีอยู่ของสารยับยั้งอย่างแรงในการสกัดกรดนิวคลีอิก (การทดสอบ) ยังสามารถนำไปสู่ “เชิงลบ” ผลลัพธ์. ชุดนี้ใช้สำหรับการขยายยีน CHD-W ในนกแก้วโดยเฉพาะเท่านั้น. สำหรับสินค้าอื่นๆ, โปรดปรึกษาผู้ผลิต.
4）ผลิตภัณฑ์นี้ใช้สำหรับการใช้งานเพียงครั้งเดียวเท่านั้น. อย่าแช่แข็งและละลายซ้ำๆ. มีไว้เพื่อวัตถุประสงค์ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น และไม่ควรใช้เพื่อการวินิจฉัยทางคลินิกหรือเพื่อวัตถุประสงค์อื่น.
