Paraffin-embedded Tissue DNA Extraction Kit

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

ข้อมูลจำเพาะ	50ต	100ต
แมว. เลขที่.	SN0251	SN0252
คอลัมน์สกัดดีเอ็นเอ (ชุด)	50 (ชุด)	100 (ชุด)
Reagent Buffer IV	20 มล	2 × 20 มล
รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ C	30 มล	2 × 30มล
Reagent Buffer FF	60 มล	2 × 60มล
ล้างบัฟเฟอร์ 1	15 มล	2 × 15 มล
บัฟเฟอร์การชะล้าง	20 มล	20 มล
โปรตีนเค	1มล	2x1มล
อาร์เนสเอ	1มล	2x1มล
คู่มือการใช้งาน	1	1

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) และในสภาวะแห้ง, มีอายุการเก็บรักษาที่ 12 เดือน. คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จากการสกัด DNA สามารถเก็บไว้ได้ 1 ปีในสภาพแวดล้อมที่เย็นและแห้ง. โปรตีน K และ อาร์เนส เอ มีสารกันบูด, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, ควรเก็บไว้ที่ -20 ℃.

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 ชุดรีเอเจนต์นี้มีไว้สำหรับการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.

3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดรีเอเจนต์มีสารระคายเคือง. แนะนำให้ใช้มาตรการป้องกัน เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา.

3.3 ระหว่างการใช้งานชุดรีเอเจนต์นี้, เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และผู้ใช้ต้องเตรียมท่อ EP.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

 

Paraffin-embedded tissue การทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ kit provides a rapid and effective DNA purification solution for samples in paraffin sections. Tissues are collected after paraffin dissolution using a dedicated dewaxing solution, and sample DNA is obtained through subsequent extraction processes.

 

This kit can extract sample DNA from paraffin sections within 30 นาที, and the entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. DNA ที่สกัดออกมาสามารถนำมาใช้ได้โดยตรง พีซีอาร์, การซับใต้, และแอพพลิเคชั่นอื่น ๆ.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

ก่อนเริ่มการทดลอง:

ก. Reagent Buffer FF:This buffer should be stored long-term in an environment between 2°C and 8°C.

บี. Reagent Buffers IV and C อาจตกตะกอนภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ. แนะนำให้อุ่นที่อุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 5 นาที. หลังจากการตกตะกอนละลาย, the solution can be used normally.

ค. ล้างกันชน 1 should have a specified amount of anhydrous ethanol added before use, ตามที่ระบุไว้ในฉลากขวดรีเอเจนต์. Check the label with a tick mark to indicate the addition of anhydrous ethanol.

ดี. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE ด้วยปริมาณ EDTA ที่น้อยที่สุด. หาก EDTA ส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, it is advisable to replace the elution buffer with sterile deionized water.

 

1. การประมวลผลตัวอย่าง:

Select 5-10 paraffin sections (1mm-3mm thickness), use scissors to remove excess wax, and cut the embedded tissue sample into small pieces. Place them in a 1.5ml centrifuge tube, เพิ่ม 800μl Reagent Buffer FF, incubate at 75°C for 5 minutes until all paraffin is dissolved. Centrifuge at 12000rpm for 5 นาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน.

2. เพิ่ม 400μl Reagent Buffer IV, 20μl proteinase k (10 มก./มล), and 10μl RNaseA (10 มก./มล) to the precipitate from the previous step. Digest at 65°C, stirring every 6-7 ครั้งจนกว่าการย่อยจะเสร็จสมบูรณ์.
3. เพิ่มปริมาณที่เท่ากันของ รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ Cและ an equal volume of anhydrous ethanol, ผสมให้เข้ากันโดยการปิเปต.

(ตัวอย่างเช่น: If you add 400μl Reagent Buffer IV, approximately add 430μl Reagent Buffer C and 430μl anhydrous ethanol. Some precipitation may occur after adding Reagent Buffer C, but it does not affect subsequent experiments.)

4. เพิ่มของเหลวที่ได้รับไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์การสกัดดีเอ็นเอ (or cartridge) (ประมาณ650-700μlในแต่ละครั้ง), let it stand at room temperature for 2 นาที, centrifuge at over 8,000rpm for 1 นาที. ทิ้งขยะที่เก็บรวบรวมและใส่เข้าไปในคอลเลกชันอีกครั้งลงในคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับขั้นตอนต่อไป.
5. ทำซ้ำขั้นตอน 4, adding the remaining liquid to the DNA extraction purification column (or cartridge), centrifuge at over 8,000rpm for 1 นาที, ทิ้งขยะและท่อรวบรวม.
6. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (or cartridge) into the collection tube, เพิ่ม 300ไมโครลิตร ล้างกันชน 1, centrifuge at over 8,000rpm for 1 นาที. Discard the waste and reinsert the purification column into the tube for the next step.

(บันทึก: Confirm that anhydrous ethanol has been added to ล้าง กันชน 1.)

7. เพิ่ม 500ไมโครลิตร ล้างกันชน 1 ไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอ (or cartridge), centrifuge at 14,000rpm (20000×ก) สำหรับ 2 นาที. Extend centrifugation time if needed for a dryer membrane.
8. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (or cartridge) in a new centrifuge tube, เปิดฝา, บ่มที่ 65 ° C สำหรับ 2 นาที. Extend this step if necessary to evaporate ethanol to prevent residual ethanol from affecting downstream experiments.
9. Suspend the addition of 50-100μl elution buffer to the membrane, centrifuge at 12,000rpm for 2 นาที.

(บันทึก: 1. Using 50μl Elution Buffer for DNA elution can increase DNA concentration but decreases total DNA yield. 2. ดีเอ็นเอที่ไหลออกสามารถนำไปใช้กับคอลัมน์การล้าง DNA, centrifuged at 12000rpm for 2 minutes again to increase DNA yield.)