ผลิตภัณฑ์นี้จะต้องบรรจุด้วยถุงน้ำแข็งและจัดส่งผ่าน FedEx หรือ UPS.
การแนะนำสินค้า：
ชุดรีเอเจนต์นี้สามารถทำการตรวจจับการขยายของยีนที่อนุรักษ์ไว้ของไวรัส polyoma นก (เอพีวี) ในตัวอย่างเช่น นก ขนนก, เลือด, เนื้อเยื่อ, swabs ช่องปาก/อวัยวะเพศ, ฯลฯ. โดยการแนะนำข้อมูลอ้างอิงภายในภายนอก, สามารถตรวจสอบการสกัดกรดนิวคลีอิกและกระบวนการขยายเพื่อให้แน่ใจว่าความแม่นยำของผลการทดสอบ.
เนื้อหาผลิตภัณฑ์：
| ส่วนประกอบรีเอเจนต์ | AP2304001-01 （24T) | AP2304001-02 （48T) |
| โซลูชันปฏิกิริยา APV | 23µL/หลุม×8หลุม/แถบ×3แถบ | 23µL/หลุม×8หลุม/แถบ×6แถบ |
| การควบคุม APV บวก | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
| การควบคุมเชิงลบ | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
สภาพการเก็บรักษา：
เก็บที่อุณหภูมิ -20 ℃, อายุการเก็บรักษาเป็นอย่างน้อย 12 เดือน
การดำเนินการทดลอง：
1. การจัดเตรียมตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)
1.1 ข้อกำหนดตัวอย่าง：
- ขนนก: รวบรวมขั้นต่ำของ 5 ขนออกจากหน้าอก, หน้าท้อง, หรือขา (รวมถึงส่วนก้านขนนกด้วย), และไม่ใช้ขนหลุดตามธรรมชาติ.
- เลือด: ใช้ EDTA เป็นสารกันเลือดแข็ง, อย่าใช้เฮปารินเป็นสารกันเลือดแข็ง. ควรใช้เลือดครบส่วนสด, หรือสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2~8°C ได้นานถึง 7 วัน, หรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C ได้นานถึง 3 เดือน. หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ ให้มากที่สุด.
- เนื้อเยื่อ: นำกล้ามเนื้อหรือเนื้อเยื่ออวัยวะสด (หลีกเลี่ยงการใช้ตัวอย่างกับผิวหนัง, เส้นเอ็น, หรือพังผืดที่ยากต่อการประมวลผล) ไม่เกิน 100 มก. เตรียมเนื้อเยื่อให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้น้ำฆ่าเชื้อ 200-500μL, แล้วจึงดำเนินการเตรียมตัวอย่างต่อไป.
1.2 การจัดเตรียมตัวอย่าง：
- อ้างถึงคู่มือของ Three Lions Biotech “ชุดสกัด DNA อย่างรวดเร็วของจีโนมสัตว์ (สำหรับ พีซีอาร์ การวิเคราะห์)” (หมายเลขชิ้นส่วน: DP202), หรือชุด/วิธีการสกัดกรดนิวคลีอิกอื่นๆ ที่ตรงตามข้อกำหนดที่เกี่ยวข้อง, สำหรับการสกัดตัวอย่างที่ผ่านการประมวลผล.
- ใส่กรดนิวคลีอิกตัวอย่างที่สกัดแล้วลงในกล่องน้ำแข็ง และพยายามดำเนินการทดสอบทันที.
- สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C ได้นานถึง 7 วันหรือที่อุณหภูมิ -20°C ได้นานถึง 6 เดือน.
2 . การเตรียมระบบปฏิกิริยา (พื้นที่ปฏิกิริยาสำหรับการเพิ่มตัวอย่าง).
2.1 นำหลอดปฏิกิริยา N+2 ออกมาซึ่งมีการควบคุม APV เป็นบวก, การควบคุมเชิงลบของ APV, และสารละลายปฏิกิริยาที่จำเป็นสำหรับการทดลอง (n หมายถึงจำนวนตัวอย่างที่จะทดสอบ, บวก 1 การควบคุมเชิงบวก, และ 1 การควบคุมเชิงลบ). ละลายรีเอเจนต์อย่างสมบูรณ์ที่อุณหภูมิห้อง, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, และหมุนของเหลวภายในผนังท่อและฝาปิดไปที่ด้านล่างของท่อ. วางไว้ในกล่องน้ำแข็งเพื่อใช้ในภายหลัง.
2.2 แล้ว, เพิ่มตัวควบคุมเชิงลบ 2μL, ตัวอย่างกรดนิวคลีอิกที่สกัดได้, และการควบคุมเชิงบวกของ APV ไปยังโซลูชันปฏิกิริยาตามลำดับ. ปิดฝาท่อ, จัดทำบันทึกที่เหมาะสม, และตรวจสอบให้แน่ใจว่าปริมาตรรวมของแต่ละปฏิกิริยาคือ 25ไมโครลิตร. ผสมเนื้อหาให้ละเอียด, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, จากนั้นจึงดำเนินการทดลองขยายสัญญาณบนเครื่องมือ PCR.
3. การขยาย PCR (พื้นที่การขยายและการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์).
- กระบวนการขยาย PCR มีดังต่อไปนี้:
- การเสียสภาพล่วงหน้าที่ 95 ℃สำหรับ 3 นาที.
- การเสียสภาพที่ 95 ℃สำหรับ 10 วินาที.
- การหลอมและการยืดที่อุณหภูมิ 60°C สำหรับ 40 วินาที, รวมเป็น 35 รอบ.
- เก็บสัญญาณเรืองแสงที่ 60°C.
- ในการตรวจจับสารเรืองแสง, เลือก FAM สำหรับช่องแรก (สำหรับยีนเฉพาะ APV), และเลือก VIC/HEX สำหรับช่องที่สอง (สำหรับยีนอ้างอิงภายนอก).
- หากใช้เครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงแบบเรียลไทม์ซีรีส์ ABI, คุณสามารถติดต่อผู้ผลิตล่วงหน้าหรือเติมสีย้อมสอบเทียบ ROX ด้วยตัวเองหากจำเป็น; มิฉะนั้น, ปฏิบัติตามขั้นตอนปกติ.
4. การกำหนดผลลัพธ์
4.1
- หากค่า Ct ของตัวควบคุมเชิงบวกทั้งในช่อง FAM และช่อง VIC/HEX เท่ากับ <30 และแสดงอัน “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, และกลุ่มควบคุมเชิงลบไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥35 และไม่มี “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, ผลการทดลองถูกต้อง.
- มิฉะนั้น, ควรทำการทดลองซ้ำ, และถ้าการทดลองซ้ำยังคงไม่ถูกต้อง, โปรดติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิค.
4.2
- ค่า Ct ของตัวอย่างในช่อง VIC/HEX ควรเป็น ≤32 และแสดง “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, บ่งชี้ว่าการสกัดและขยายตัวอย่างมีประสิทธิผล.
- หากไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct เป็น 32 < กะรัต ≤ 35 ในช่อง VIC/HEX, บ่งชี้ว่าตัวอย่างการสกัดกรดนิวคลีอิกไม่ได้มาตรฐานหรือมีการแทรกแซงการยับยั้งอย่างรุนแรง (เช่นสารตกค้างของแอลกอฮอล์หรือยาฆ่าเชื้อ, สารกันเลือดแข็ง, ฯลฯ) ที่ขัดขวางการขยายเสียง.
- ขอแนะนำให้ประมวลผลตัวอย่างซ้ำเพื่อการสกัดและขยายกรดนิวคลีอิก.
4.3 หลังจากการตรวจจับในช่อง VIC/HEX ถูกต้องแล้ว, การกำหนดในช่อง FAM จะดำเนินการดังนี้:
- ค่ากะรัต ≤ 32 และ “ส”-สังเกตเส้นโค้งการขยายรูปทรง, มันถูกพิจารณาว่าเป็นผลบวกสำหรับ APV, บ่งชี้ว่ามีไวรัส APV อยู่ในตัวอย่าง.
- ค่ากะรัตคือ 32 < กะรัต < 35, ถือว่าเป็นที่น่าสงสัย, และควรทดสอบตัวอย่างอีกครั้ง (โดยการสกัดซ้ำและทดสอบกรดนิวคลีอิก, แนะนำให้ยกเว้นก่อน “บวกเท็จ” ผลลัพธ์ที่เกิดจากการปนเปื้อนของละอองลอยในสิ่งแวดล้อม). หากการทดสอบซ้ำในช่อง FAM หลังจากไม่รวมการปนเปื้อนของละอองลอยแล้ว แสดงค่า Ct < 35 และเส้นโค้งการขยายเสียงที่ชัดเจน, มันถูกพิจารณาว่าเป็นผลบวกสำหรับ APV; มิฉะนั้น, มันถูกพิจารณาว่าเป็นลบ.
- ไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 35 และไม่ “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, ถูกกำหนดให้เป็นลบสำหรับ APV, แสดงว่าตรวจไม่พบไวรัส APV ในตัวอย่าง.
ข้อควรระวัง：
- เพื่อป้องกันการปนเปื้อน, การทดลองควรดำเนินการอย่างเคร่งครัดโดยแบ่งพาร์ติชัน. ควรมีการแยกทางกายภาพระหว่างพาร์ติชันเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามที่เกิดจากปัจจัยมนุษย์. สวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือยางในระหว่างการทดลอง, และใช้เครื่องมือแยกกันในด้านต่างๆ. เปลี่ยนถุงมือและเสื้อกาวน์ตามความจำเป็น. หลังจากทำ PCR, อย่าเปิดฝาทันที. รอให้เย็นเพียงพอก่อนเปิดเก็บตัวอย่างเพื่อลดการปนเปื้อนของละอองลอย.
- ละลายรีเอเจนต์ให้หมดก่อนใช้งาน, แต่หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ. ปฏิบัติตามคำแนะนำอย่างเคร่งครัดในการเตรียมรีเอเจนต์, นอกจากนี้ตัวอย่าง, และขั้นตอนอื่นๆ. โต๊ะทำงาน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปต, และเครื่องมืออื่นๆ ควรฆ่าเชื้อด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นประจำ, เอทานอล, สารกำจัดการปนเปื้อนของกรดนิวคลีอิก, หรือโคมไฟอัลตราไวโอเลต.
- ผลลัพธ์เชิงลบไม่ได้หมายถึงผู้ชาย. การกลายพันธุ์ที่ไม่รู้จัก, คุณภาพตัวอย่างไม่ดี, ความเข้มข้นต่ำ, หรือการมีอยู่ของสารยับยั้งอย่างแรงในการสกัดกรดนิวคลีอิก (การทดสอบ) ยังสามารถนำไปสู่ “เชิงลบ” ผลลัพธ์. ชุดนี้ใช้สำหรับการขยายยีน CHD-W ในนกแก้วโดยเฉพาะเท่านั้น. สำหรับสินค้าอื่นๆ, โปรดปรึกษาผู้ผลิต.
- ผลิตภัณฑ์นี้มีไว้สำหรับใช้ครั้งเดียวเท่านั้น. อย่าแช่แข็งและละลายซ้ำๆ. มีไว้เพื่อวัตถุประสงค์ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น และไม่ควรใช้เพื่อการวินิจฉัยทางคลินิกหรือเพื่อวัตถุประสงค์อื่น.
