1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์
| ข้อมูลจำเพาะ | 50ต | 100ต |
| แมว. เลขที่. | SN0221 | SN0222 |
| คอลัมน์สกัดดีเอ็นเอ (ชุด) | 50 (ชุด) | 100 (ชุด) |
| รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ IV | 20 มล | 2×20 มล |
| รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ Cplus | 30 มล | 30 มล |
| ล้างบัฟเฟอร์ 1 | 15 มล | 2 × 15 มล |
| บัฟเฟอร์การชะล้าง | 20 มล | 20 มล |
| โปรตีนเค | 1มล | 2x1มล |
| อาร์เนสเอ | 1มล | 1มล |
| คู่มือการใช้งาน | 1 | 1 |
2. พื้นที่จัดเก็บ
ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) และในสภาวะแห้ง, มีอายุการเก็บรักษาที่ 12 เดือน. คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จากการสกัด DNA สามารถเก็บไว้ได้ 1 ปีในสภาพแวดล้อมที่เย็นและแห้ง. โปรตีน K และ อาร์เนส เอ มีสารกันบูด, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, ควรเก็บไว้ที่ -20 ℃.
3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์
3.1 ชุดรีเอเจนต์นี้มีไว้สำหรับการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.
3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดรีเอเจนต์มีสารระคายเคือง. แนะนำให้ใช้มาตรการป้องกัน เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา.
3.3 ระหว่างการใช้งานชุดรีเอเจนต์นี้, เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และผู้ใช้ต้องเตรียมท่อ EP.
4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์
สัตว์/เนื้อเยื่อ การทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ Kit นำเสนอวิธีแก้ปัญหาที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพสำหรับการทำให้เนื้อเยื่อสัตว์และการเพาะเลี้ยง DNA บริสุทธิ์, ใช้กันอย่างแพร่หลายในเนื้อเยื่อของสัตว์และการเพาะเลี้ยงเซลล์.
ชุดการทำให้บริสุทธิ์ DNA อย่างรวดเร็วนี้จะแยก DNA ทั้งหมดจากสัตว์และเซลล์อย่างรวดเร็ว, ทำให้มี DNA ที่สามารถนำไปใช้ได้โดยตรง พีซีอาร์, การซับใต้, และแอปพลิเคชันที่คล้ายกัน. กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ไม่จำเป็นต้องใช้สารพิษ เช่น ฟีนอล-คลอโรฟอร์ม, ทำให้ชุดการทำให้บริสุทธิ์ DNA นี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับตัวอย่างอื่นๆ มากมาย.
5. หลักและวิธีการทดลอง
6. กระบวนการสกัด
ก่อนเริ่มการทดลอง:
ก. รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ IV มีแนวโน้มที่จะตกตะกอนภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ. แนะนำให้ตั้งอุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 5 นาที. หลังจากฝนละลายแล้ว, สามารถใช้งานได้ตามปกติ.
บี. ก่อนใช้งาน, เพิ่มจำนวนเอทานอลที่ปราศจากน้ำ ล้างกันชน 1 ตามที่ระบุไว้ในฉลากขวดรีเอเจนต์, และทำเครื่องหมายบนฉลากเพื่อระบุการเติมเอทานอลแบบแอนไฮดรัส.
ค. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE โดยมีเนื้อหา EDTA น้อยที่สุด. หาก EDTA อาจส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, ขอแนะนำให้เปลี่ยน Elution Buffer ด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ปราศจากไอออน.
- การจัดการตัวอย่าง:
ก. เพาะเลี้ยงเซลล์, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาทีในการรวบรวมเซลล์, และดูดส่วนเหนือตะกอนให้มากที่สุด. เพิ่ม 250μl ของ Reagent Buffer IV และ 10μl ของ RNaseA (10 มก./มล) ไปยังเซลล์ที่รวบรวมไว้, ระงับอย่างทั่วถึง, และฟักที่อุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 10 นาที.
บี. บดเนื้อเยื่อไม่เกิน 25 มก. ให้เป็นผงละเอียดโดยใช้ไนโตรเจนเหลว. เพิ่ม 200μl ของ Reagent Buffer IV, 20μlของ proteinase k (10 มก./มล), และ 10μl ของ RNaseA (10 มก./มล) ให้เป็นผง, เขย่าขวดให้เข้ากัน, และฟักที่อุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 30 นาที, เขย่าส่วนผสมสี่ครั้งในช่วงเวลานี้.
2. เพิ่ม 200μl ของบัฟเฟอร์รีเอเจนต์ Cplus ให้เป็นไลซีนและผสมให้เข้ากัน. หากมีการตกตะกอนสีขาวปรากฏขึ้น, ก็สามารถปล่อยให้ไม่ถูกรบกวนได้; มันจะไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองที่ตามมาเมื่อการตกตะกอนหายไป.
3. เพิ่ม 200เอทานอลปราศจากน้ำ ไมโครลิตร และผสมให้เข้ากัน. อาจมีฝนตกบ้าง, แต่มันจะไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองครั้งต่อไป.
4. ใช้ของเหลวที่ได้รับกับคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (ปลอกหุ้ม) (ประมาณ 650~700μl ในแต่ละครั้ง), ปล่อยให้นั่งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 นาที, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะที่รวบรวมไว้, และใส่ท่อรวบรวมกลับเข้าไปในคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับขั้นตอนต่อไป.
5. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (ปลอกหุ้ม) สู่คอลเลกชั่นใหม่, เพิ่ม 700ไมโครลิตรของ ล้างกันชน 1, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะ, และวางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จากการสกัด DNA (ปลอกหุ้ม) กลับเข้าไปในแขนเสื้อสำหรับขั้นตอนต่อไป.
(บันทึก: ยืนยันการเติมเอทานอลแบบแอนไฮดรัสลงในบัฟเฟอร์การล้าง 1.)
6. เพิ่ม 500ไมโครลิตรของ ล้างกันชน 1 ไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอ (ปลอกหุ้ม), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ขยายเวลาการปั่นแยกอย่างเหมาะสมเพื่อให้แน่ใจว่าเมมเบรนแห้งมากขึ้น.
(บันทึก: เอทานอลมีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการทดลองครั้งต่อไป; ดังนั้น, ความแห้งของเมมเบรนเป็นสิ่งสำคัญ. หลังจากการปั่นแยก, ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีเอทานอลเหลืออยู่ก่อนการชะล้าง. ทิ้งขยะและท่อรวบรวมหลังจากนั้น. หลังจากล้างด้วย Wash Buffer แล้ว 1, เมมเบรนบนคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ DNA ควรมีสีจาง ๆ. ค่อยๆ เอาคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ของ DNA ออกหลังจากการปั่นแยก, เพื่อไม่ให้สัมผัสท่อรวบรวมเพื่อป้องกันการปนเปื้อนเอธานอล)
7. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ DNA ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงอันใหม่, เพิ่ม Elution Buffer 100μl ลงบนเมมเบรนโดยตรง, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, และรวบรวม DNA.
(บันทึก: การชะ DNA ด้วย Elution Buffer 50μl สามารถเพิ่มความเข้มข้นของ DNA ได้ แต่จะทำให้ปริมาณ DNA ทั้งหมดลดลง)
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์