조직 DNA/RNA 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

명세서	50티	100티
고양이. 아니요.	SN0329	SN0330
DNA 청소 열 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
RNA 추출 컬럼 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
RNA 추출 버퍼 i	30 밀리리터	2×30 밀리리터
RNA Extraction Buffer IV	30 밀리리터	2×30 밀리리터
억제제 제거 버퍼	2×30 밀리리터	4×30 밀리리터
세척 버퍼 1	2×15 밀리리터	3×15 밀리리터
용출 버퍼	20 밀리리터	20 밀리리터
단백질분해효소 K	1밀리리터	2x1ml
사용 설명서	1	1

 

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) in a dry condition and is stable for 12 개월. Proteinase K contains a stabilizer, allowing it to be transported at room temperature; 하지만, 장기 저장 용, -20℃에 보관해야 합니다.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

The sample DNA/RNA simultaneous isolation and purification kit provide a fast and efficient purification solution for tissue sample DNA/RNA. This kit offers two sets of lysis systems, suitable for various sample tissues and cells, including most plants, 동물, 박테리아, 등.

The DNA/RNA rapid purification kit can extract total DNA/RNA from samples within 1 시간. The extracted DNA/RNA can be directly used for RT-PCR, 노던 블로팅, 등. 전체 정제 공정에는 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다..

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. 사용하기 전에, 지정된 양의 무수 에탄올을 첨가하십시오. 씻다완충기 1 시약병의 라벨에 따라, and mark a check on the label to indicate the addition of absolute ethanol.

비. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA로. If EDTA has an impact on subsequent experiments, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the elution buffer.

씨. RNA Extraction Buffer I is designed for the extraction of plant and fungal samples, while RNA Extraction Buffer IV is primarily used for animal tissues, 피, and other sample tissues.

1. 샘플 처리:
2. Plant/animal tissue materials: Collect samples using liquid nitrogen, grind the collected material directly in liquid nitrogen, and proceed to step 2 (recommended to use RNA Extraction Buffer I).
3. Cell tissues: Centrifuge and collect <107 suspended cells in a 1.5 ML 원심 분리 튜브, quickly proceed to step 2 (recommended to use RNA Extraction Buffer III).
4. 추가하다 500μl RNA Extraction Buffer I/RNA Extraction Buffer IV, 10μl 단백질분해효소 K, vortex and mix thoroughly. Ensure gentle mixing in this step to prevent mechanical cutting of tissue DNA and reduce DNA yield.
5. Transfer the lysate to a DNA 정제 열, 원심분리기 13,000 rpm 2 분, 여과 액을 수집하십시오 (RNA는 여과 액에 존재한다). 이 지점에서, DNA is adsorbed on the DNA column and can be briefly stored at 4°C while simultaneously collecting RNA in the next steps.

(메모: If the sample is plant tissue, 원심분리기 13,000 rpm 10 분, and add the supernatant to the DNA binding column.)

4. Precisely estimate the volume of the filtrate, 추가하다 5 times thevolume of absolute ethanol, 잘 섞는다. 강수량이 발생한 경우, 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다.
5. RNA 추출 정제 컬럼에 얻은 액체를 추가하십시오. (매번 약 650-700μl), 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 수집된 폐액을 폐기합니다., 다음 단계를 위해 수집 튜브를 정제 컬럼에 다시 삽입합니다..
6. 단계 반복 5, RNA 추출 정제 컬럼에 나머지 액체를 추가하십시오., 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, discard the waste liquid and collection tube, place the RNA extraction purification column in a new collection tube, and prepare for simultaneous collection of DNA.
7. 추가하다 600μl 억제제 제거 완충액 to the DNA extraction purification column and RNA extraction purification column, 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 폐액을 버리다, and reinsert the DNA/RNA purification column into the collection tube for the next step.
8. 추가하다 700μl 세척 완충액 1 to the DNA extraction purification column and RNA extraction purification column, 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분. Extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.

(메모: 절대 에탄올이 세척 완충액에 첨가되었는지 확인하십시오. 1. The presence of ethanol has a significant impact on subsequent experiments, 그래서 멤브레인 건조가 중요합니다. 원심분리 후, 용출 전에 에탄올이 존재하지 않는지 확인하십시오., then discard the waste liquid and collection tube.

세척 완충제로 세척 한 후 1, the membrane of the RNA purification column should only have a slight color. 원심분리 후, RNA 정제 컬럼을 조심스럽게 제거하십시오, ensuring no contact with the collection tube to avoid ethanol interference.)

9. Place the DNA/RNA purification column into a new centrifuge tube, 똑똑 떨어지는 물방울 소리 50-100 막에 μL 용리 완충액, 실온에서 배양하다 5 분 (15°C-25°C), 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분.

(메모: Eluting nucleic acids with 50 μl Elution Buffer can increase the nucleic acid concentration but decrease the total nucleic acid yield.)

• 메모:

1. 일반적으로, larger elution volumes result in higher elution efficiency, but to increase nucleic acid concentration, the elution volume can be reduced, but not below 50 μl.
2. RNA, in the presence of RNA Extraction Buffer I/RNA Extraction Buffer III, is not degraded by RNAse but should be distinguished from DNA in subsequent experiments. Use RNAse-free consumables for RNA separation whenever possible.