대변 ​​또는 토양 게놈 DNA 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

명세서	50티	100티
고양이. 아니요.	SN0241	SN0242
DNA 추출 컬럼 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
부식산제거시약Ⅰ	50밀리리터	2x50ml
부식산제거시약II	50밀리리터	2x50ml
시약 완충용액 Ⅴ	30 밀리리터	2×30 밀리리터
시약 완충액 C 플러스	30 밀리리터	2×30 밀리리터
억제제 제거 버퍼	30밀리리터	2x30ml
라이소자임	1밀리리터	2x1ml
단백질분해효소 K	1밀리리터	2x1ml
RNase A	1밀리리터	2x1ml
세척 버퍼 1	15 밀리리터	2 × 15 밀리리터
용출 버퍼	20 밀리리터	2 ×20ml
사용 설명서	1	1

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 그리고 건조한 환경에서는, 유효기간이 있는 12 개월. DNA 추출 정제 컬럼은 다음 용도로 보관할 수 있습니다. 1 시원하고 건조한 환경에서 1년 동안. 라이소자임, 단백질분해효소 K, 그리고 RNase A 방부제 함유, 실온에서 운송 가능, 하지만 장기간 보관을 위해서는, -20℃에 보관해야 합니다.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 시약 키트는 분자생물학 연구용이므로 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 시약 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.. 보호복, 고글 착용 등의 보호 조치가 권장됩니다..

3.3 이 시약 키트를 사용하는 동안, 고속 원심분리기, 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 멸균 탈이온수, EP 튜브는 사용자가 준비해야 합니다..

4. 시약 키트 소개

이 키트는 토양에서 미생물 게놈 DNA를 정제하는 빠르고 효율적인 방법을 제공합니다., 대변, 그리고 구토 샘플. 토양에서 미생물 DNA 추출에 널리 사용됩니다., 대변, 그리고 토하다.

 

이 키트는 시료의 불순물과 억제제를 효과적으로 제거합니다., 다음과 같은 다운스트림 실험에서 억제 반응 감소 PCR. 전체 정제 공정에는 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다.. 추출된 DNA를 바로 PCR에 사용할 수 있습니다., 서던 블로팅, 및 기타 응용 프로그램.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험을 시작하기 전에:

ㅏ. 시약 완충액 IV 저온 조건에서 침전될 수 있음. 65℃로 가열하는 것을 권장합니다. 5 분. 침전물이 용해된 후, 정상적으로 사용할 수 있어요.

비. 사용하기 전에, 규정량의 무수에탄올을 첨가한다. 세척 버퍼 1 병 라벨에 표시된대로. 무수 에탄올 첨가를 나타내기 위해 라벨에 체크 표시를 하십시오..

씨. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA 함유. EDTA가 후속 실험에 영향을 미칠 수 있는 경우, Elution Buffer를 멸균 탈이온수로 대체하는 것이 좋습니다..

1. 샘플 처리 (억제제 제거):

ㅏ. 분변 및 구토 샘플: 추출할 시료를 약 200mg 첨가합니다., 추가하다 1ml의 부식산 제거 시약 I, 철저히 소용돌이 1-2 분, 원심분리기 12,000 rpm 2 분, 상층액을 버린다, 추가하다 560버퍼 IV의 μl 펠렛에, 뒤집어서 잘 섞어주세요, 85℃에서 소화 5 분, 뒤집어서 섞는다 6-7 소화 중 시간, 그런 다음 진행 단계 2.

비. 토양 샘플: 무게 약 0.1g-0.5체로 쳐진 흙의 g, 추가하다 500완충제 IV μl 및 휴믹산 제거 시약 I 100μl, 뒤집어서 잘 섞어주세요, 85℃에서 소화 5 분, 뒤집어서 섞는다 6-7 소화 중 시간, 그런 다음 진행 단계 2.

(메모: 휴믹산 제거 시약 I/휴믹산 제거 시약 II 부식산 함량이 높은 토양에 주로 사용됩니다., 산림 토양 및 퇴적 토양과 같은. 추가하다 1ml의 부식산 제거 시약 I 샘플에, 와동, 흔들어 1-2 분, 원심분리기 8,000 rpm 2 분, 상층액을 버린다, 그런 다음 추가 1휴믹산 제거 시약 II의 ml, 와동, 원심분리기 8,000 rpm 2 분, 상층액을 버린다. 이 단계는 토양 부식산 억제제를 더욱 감소시킬 수 있지만 DNA 수율을 크게 감소시킵니다..)

2. 원심분리기 12,000 rpm 2 분, 상등액을 새로운 원심분리 튜브로 옮긴다 (약 500μl 액체 이송), 20μl 단백질분해효소 K를 첨가하세요 (10 mg/ml), 20μl 리소자임, 및 20μl RNase A, 65℃에서 배양합니다. 2 분.
3. 같은 양의 것을 추가하십시오. 시약 버퍼 C 플러스 (약 560μl 액체 이송) 용해물에, 잘 섞다. 흰색 침전물이 나타나는 경우, 해결하자; 침전물이 사라진 후 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다..
4. 같은 양의 에탄올을 첨가한다. 시약 버퍼 C 플러스 (예를 들어, 추가하다 560μl의 시약 버퍼 C 플러스, 그런 다음 에탄올 560μl를 추가하십시오.), 잘 섞다. 강수량이 있을 수 있습니다, 하지만 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다..
5. 얻은 액체를 DNA 추출 정제 컬럼에 첨가합니다. (소매) (매번 약 650-700μl), 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 수집된 폐액을 폐기합니다., 수집 튜브를 DNA 추출 정제 컬럼에 다시 삽입합니다. (소매) 다음 단계를 위해.
6. 추가하다 400μl 억제제 제거 완충액, 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 폐액을 버리다, 그리고 다시 삽입 DNA 정제 다음 단계를 위해 컬럼을 슬리브에 넣습니다..
7. 추가하다 500μl 세척 완충액 1 DNA 추출 정제 컬럼으로 (소매), 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 1 분.
8. 추가하다 300μl 세척 완충액 1 다시 DNA 추출 정제 컬럼으로 (소매), 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분.
9. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (소매) 새로운 원심분리 튜브에, 뚜껑을 열어라, 65℃에서 배양합니다. 2 분. 에탄올 잔류물이 다운스트림 실험에 영향을 미치지 않도록 가능한 한 많이 에탄올을 증발시키는 데 필요한 경우 이 단계를 확장할 수 있습니다..
10. 똑똑 떨어지는 물방울 소리 100μl 용출 완충액 멤브레인 위에, 원심분리기 12,000 rpm 2 분.

(메모: 1. 50μl Elution Buffer로 DNA를 용출하면 DNA 농도는 증가하지만 총 DNA 수율은 감소할 수 있습니다.; 2. 용출된 DNA는 DNA 추출 정제 컬럼에 재적용 가능, 다시 원심분리했다 12,000 rpm 2 분, DNA 수율을 높이기 위해 수집되었습니다..)