Solarbio 젖산염 탈수소효소 (LDH) 활동 분석 키트

젖산염 탈수소효소 (LDH) 활동 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

운영장비: 분광 광도계/마이크로플레이트 리더

고양이 번호: BC0685

크기:100T/48S

구성요소:

용액 추출: 60 밀리리터×1. 4℃에서 보관；

시약 I: 7 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 II: 가루×1. -20℃에서 보관. 작업 솔루션: 함께 용해 1.3 사용 전 증류수 mL. 일치 후 세관으로 나눌 수 있습니다, -20 °에서 2 주 동안 보존 할 수 있습니다. 반복적 인 동결과 해동 사이클을 피하십시오.

시약 III: 7 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 IV: 25 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

나트륨 피루 베이트 표준 용액: 1 밀리리터 (2 μmol/mL) × 1. 4℃에서 보관.

제품 설명:

젖산 탈수소 효소 (LDH 또는 LD) 거의 모든 살아있는 세포에서 발견되는 당분 해 경로의 말단 효소입니다. (동물, 식물, 그리고 원핵 생물). LDH는 락 테이트를 피루브산 및 등으로 전환시키는 것을 촉진합니다., NAD+를 NADH로 변환하고 뒤로 변환합니다.

NAD+ 및 젖산은 LDH의 촉매에 의해 피루브 산으로 산화됩니다.. 피루 베이트는 2,4- 디 니트로 페닐 하이드라 지드와 추가로 반응하여 피루 베이트 디 니트로 벤존을 형성 하였다, 알칼리성 용액에서 갈색 붉은 색을 나타내고 색 깊이는 피루 베이트의 농도에 비례합니다..

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:

분광 광도계/마이크로플레이트 리더, 온도 조절기 수조, 책상 원심분리기, 조절 가능한 피펫, 마이크로 유리 큐벳/96웰 평면 바닥 플레이트, 모르타르/균질화기, 얼음, 증류수.

절차:

나. 견본 준비:

1. 박테리아, 세포, 또는 조직 샘플:

박테리아 또는 세포:

박테리아 또는 세포를 원심분리 튜브에 수집. 원심 분리 후 상부 층의 액체가 폐기됩니다.. 박테리아/세포 양의 비율 (104): 솔루션 볼륨 추출 (밀리리터) 500~1000 입니다:1(약 복용하는 것이 좋습니다 5 백만 개의 박테리아/세포를 추가하고 1 mL의 추출 용액). 박테리아와 세포는 초음파에 의해 분할됩니다 (얼음 위에 놓음, 200여, 작업시간 3초, 간격 10초, 반복하다 30 타임스). 원심분리기 8000 rpm 4 ℃ 10 분, 상청액을 가져 와서 얼음에 넣어 테스트.

조직:

Ice-bath 균질성은 조직 질량의 비율에 따라 수행됩니다. (g): 솔루션 볼륨 추출 (밀리리터) = 1: 5~10 (취하는 것이 좋습니다 0.1 g 티슈 추가 1 mL의 추출 용액). 얼음 목욕 균질화. 원심분리기 8000 rpm 및 4℃ 10 분, 상청액을 가져 와서 얼음에 넣어 테스트.

2. 혈청 (혈장)견본:

샘플을 직접 감지하십시오.

II. 절차:

1. 분광 광도계/마이크로 플레이트 리더를 예열하십시오 30 분, 파장을 조정하다 450 nm, 증류수로 0을 설정하다.
2. 나트륨 피루 베이트 표준 용액: 가져가다 100 표준 용액의 μl, 희석 1, 5, 0.25, 0.125, 0 μmol/mL, 그리고 사용 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0 표준 곡선으로서의 μmol/ml.

3. 샘플 테스트

시약명 (μL)	시험관(~에)	컨트롤 튜브(AC)	표준 튜브(처럼)
견본	10	10	–
표준 솔루션	–	–	10
시약 I	50	50	50
시약 II	10	–	–
증류수	–	10	10
철저히 혼합, 37 at에서 배양하십시오(포유 동물) 또는 25℃(다른 종) 수욕 15 분.
시약 III	50	50	50
철저히 혼합, 37 at에서 배양하십시오(포유 동물) 또는 25℃(다른 종) 수욕 15 분.
시약 IV	150	150	150

철저히 혼합, 실온에 배치하십시오 3 분. 가져가다 200 마이크로 유리 큐벳에서 반응 용액의 μL/96 웰 평평한 바닥 판, 흡광도를 측정했습니다 450 nm, ΔA = AT-AC. 각 테스트 튜브는 제어 튜브를 설정해야합니다.

III. LDH 계산.

1. 샘플 나트륨 피루 베이트 함량
2. 표준 곡선을 설정하십시오, 표준 농도로서의 y 축, μmol/mL, x 축으로 450 NM 흡수. ΔA를 넣으십시오(엑스) 표준 곡선으로, y를 계산합니다(μmol/mL)
3. 혈청 (혈장) 샘플 LDH 활동

단위 정의: 효소 활성의 한 단위는 효소의 양이 생산을 촉매하는 것으로 정의된다. 1 분당 피루본의 NMOL, 혈청의 모든 밀리 리터.

LDH(U/mL)= y ÷ t × 103 = 66.7 × y

4. 조직, 박테리아 또는 배양 된 세포 LDH 활성

ㅏ. 단백질 농도:

단위 정의: 효소 활성의 한 단위는 효소의 양이 생산을 촉매하는 것으로 정의된다. 1 분당 피루본의 NMOL, 단백질 1mg당.

LDH(U/mg 프로트)= Y ÷ T ÷ CPR × 103 = 66.7 × Y ÷ CPR

비. 샘플 중량

단위 정의: 효소 활성의 한 단위는 효소의 양이 생산을 촉매하는 것으로 정의된다. 1 분당 피루본의 NMOL, 조직의 모든 그램에서. LDH(U/g)= y ÷ t ÷ w × 103 = 666.7 × y

씨. 셀량

단위 정의: 효소 활성의 한 단위는 효소의 양이 생산을 촉매하는 것으로 정의된다. 1 매 분당 피루본의 NMOL 10000 세포.

LDH(U/104 셀)= y ÷ t ÷ 500 × 103 = 0.133 × y

대: 슈퍼네이트 볼륨 (밀리리터), 0.01 밀리리터; VSV: 솔루션 볼륨 추출, 1 밀리리터; 티: 반응 시간, 15 분;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL; 여: 샘플 중량, 0.1 g;

500: 박테리아 또는 세포의 총 수, 5 백만; 103: 1 μmol/ml = 103 nmol/ml.

참고자료

[1] Huang P h, fu l c, Huang C s, 외. Oligogalacturonide의 흡수 및 성장 억제에 미치는 영향, 인간 암 세포의 젖산 탈수소 효소 활성 및 갈락틴 -3 방출[제이]. 음식 화학, 2012, 132(4): 1987-1995.

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