솔라바이오 하이드록시프롤린 (우울) 활동 분석 키트

하이드록시프롤린 (우울) 활동 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

탐지장비: 분광 광도계/마이크로플레이트 리더

고양이 번호: BC0255

크기: 100T/96S

 

구성요소:

용액 추출: 6 mol/L 염산 (HCl), 자체 제공 시약. 농축 염산( 37%) : H2O(V/V) =1:1, 실온에 보관.

시약 I: 8 밀리리터×1, 4℃에 보관하고 차광하여 보관하세요. 시약 II: 8 밀리리터×1, 4℃에 보관하고 차광하여 보관하세요. 기준: 0.5 밀리리터×1, 0.5 mg/mL 히드록시프롤린, 4℃에 보관.

설명:

HYP는 체내 콜라겐의 주요 구성 요소 중 하나입니다.. 콜라겐의 대부분은 피부에 분포되어 있습니다., 건, 연골, 혈관 등. 그러므로, HYP의 함량은 콜라겐 조직의 대사와 섬유화 정도를 반영하는 중요한 지표입니다..

샘플을 가수분해하여 유리 HYP를 생성합니다., 클로라민 T에 의해 더욱 산화됩니다.. 산화된 생성물은 p-디메틸아미노벤즈알데히드와 반응하여 다음과 같은 특징적인 흡수 피크를 갖는 빨간색 화합물을 생성합니다. 560 nm. HYP의 함량은 시료 가수분해물의 흡수값을 측정하여 계산할 수 있습니다. 560 nm.

필수이지만 제공되지 않음:

저울, 오븐, 유리관, 원심분리기, 욕조, 분광 광도계/마이크로플레이트 리더, 마이크로 유리 큐벳/96웰 플레이트, 6 mol/L HCl 및 증류수.

절차:

나. 샘플 준비

1. 1. 조직 샘플:

무게를 재다 0.2 g의 샘플을 유리관에 넣습니다., 소화를 위해 조직을 최대한 조각으로 자릅니다.. 추가하다 2 mL의 추출 용액과 덮개가 약간 느슨하고 밀폐되지 않음, 삶거나 110℃ 오븐에 굽는다. 2 에게 6 눈에 보이는 큰 덩어리가 없을 때까지 소화하는 데 몇 시간이 걸립니다..

식힌 후, pH를 조정하다 6-8 ~와 함께 10 mol/L NaOH (산이나 알칼리를 과도하게 사용하지 마십시오.) 그런 다음 일정한 볼륨을 4 mL(증류수 포함). 원심분리 16000 rpm 20 25℃에서 분 (원심분리 후에도 불순물이 남아 있는 경우, 여과로 제거할 수 있다).

시험을 위해 상청액을 채취한다. (이 과정에서 검은 물질이 생성될 수 있습니다., 그리고 오랫동안 소화가 되지 않는다면, 탄화된 물질일 수도 있습니다. 실험에 영향을 미치지 않습니다).

2. 세포:

가져가다 5 백만개의 세포, 추가하다 1 mL의 추출 용액, 종기, 또는 110℃ 오븐에서 2 에게 6 투명한 상태로 소화하는 데 몇 시간.

식힌 후, pH를 조정하다 6-8 ~와 함께 10 mol/L NaOH (산이나 알칼리를 과도하게 사용하지 마십시오.) 그런 다음 일정한 볼륨을 2 mL(증류수 포함). 원심분리 16000 rpm 20 25℃에서 분 (원심분리 후에도 불순물이 남아 있는 경우, 여과로 제거할 수 있다).

시험을 위해 상청액을 채취한다.

II. 발각

1. 예열 분광 광도계/마이크로플레이트 판독기 30 분, 파장을 조정하다 560 nm, 증류수로 0으로 설정
2. 표준용액을 희석하여 30, 15, 7.5, 3.75, 1.875, 0.938, 0.469, 0.234 μg/mL.
3. 다음 표와 같이 시약을 추가합니다..

시약 (μL)	빈 튜브 (비)	시험관 (티)	표준 튜브 (에스)
견본	–	60	–
기준	–	–	60
시약 I	60	60	60
잘 섞은 뒤 실온에 잠시 두세요 20 분.
시약 II	60	60	60
증류수	180	120	120

잘 섞다, 60℃에서 배양 20 분, 실온에 놔두세요 15 분, 200μL의 반응 용액을 마이크로 유리 큐벳/96웰 평면 바닥 플레이트에 넣고 흡광도 값을 테스트합니다. 560 nm. ΔA = AT – AB.

III. 계산

1. 표준 만들기

표준곡선을 만들 때, 표준용액의 농도를 x축으로 한다., 그리고 ΔAS (ΔAS=AS-AB) 는 y축으로 취해진다.. 선형 방정식 y=kx+b가 얻어집니다.. ΔAT를 취하라 (AND-AB) x를 얻기 위한 방정식에.

2. 하이드록시프롤린 함량 계산:샘플의 새로운 중량에 따라 계산됨:

조직 하이드록시프롤린 함량 (μg/g 신선 중량) = x×VS ²(W×VS²VTE) = 4x²W.

• 샘플 단백질 농도에 따라 계산됨:

조직 하이드록시프롤린 함량 (μg/mg prot) = x×VS ²(CPR×VS) = x ¼ Cpr.

• 박테리아 또는 세포의 수에 따라 계산됩니다.:

세포 하이드록시프롤린 함량 (μg/104셀) = x×VS ²(N×VS²VCE )= 2xnn.

VS: 추가된 샘플의 양, 0.06 밀리리터;

VTE: 조직 추출 용액의 부피, 4 밀리리터; VCE: 세포추출액의 부피, 2 밀리리터;

여: 샘플의 신선한 무게, g;

N: 셀 수,104 단위로, 10000;

심폐소생술: 샘플 단백질의 농도, mg/mL.

메모

1. OD 값이 다음보다 큰 경우 1.0, 샘플을 적절하게 희석한 후 결정해야 합니다.. 계산식에서 희석배수를 곱하는 것에 주의하세요..
2. 시약에는 특정 독성이 있습니다.. 흡입이나 피부 접촉을 방지하기 위해 작동 중에 보호 조치를 취하십시오..
3. 시료 단백질 농도에 따라 계산할 경우, 시료 자체의 단백질을 별도로 추출하여 측정해야 합니다..

실험예

• 0.2샘플 처리를 위해 마우스 다리 g을 채취합니다., 상층액을 꺼내어 측정단계에 따라 조작한다.. ΔA =AT-AB = 0.177-0.06 = 0.117 에 의해 측정됩니다 96 우물 접시, 표준 곡선 y = 0.0383x + 0.022 반입된다, 그리고 x = 2.48 ~이다

조직 내 하이드록시프롤린 함량 (μg/g 질량) = 4x ​​¼ W = 4 × 2.48 ¶ 0.2 = 49.6 μg/g 질량.

최근 제품 인용

• 리통 팬,첸 자칭,옌멍 타오,외. 중간엽줄기세포의 연골분화 강화 및 그렐린에 의한 연골 복구. 정형외과 연구 저널. 1월 2019;(IF3.043)

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기술 사양:

검출 한계: 0.057 μg/mL

선형 범위: 0.117-30 μg/mL