솔라바이오 과산화수소 (H2O2) 콘텐츠 분석 키트

기인하다	세부
메모	테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다.
탐지 장비	분광 광도계 / 마이크로플레이트 리더
고양이 번호	BC3595
크기	100T/96S

구성요소:

시약 I: 아세톤 100mL×1. 4℃에서 보관. (자체 제공 시약)

시약 Ⅱ: 가루×1. 4℃에서 보관. 작업 솔루션: 진한 염산 3mL를 첨가한다. (37%) 사용하기 전에, 완전히 용해됨. 사용하지 않은 시약은 다음 위치에 보관되어 있습니다. 4 ℃.

시약 Ⅲ: 6밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 Ⅴ: 30밀리리터×1. 4℃에서 보관.

기준: 1밀리리터×1, 1mmol/mL H2O2 표준 용액. 4℃에서 보관.

제품 설명:

H2O2는 유기체에서 가장 흔한 활성 산소 분자입니다.. 주로 SOD와 XOD의 촉매작용에 의해 생성되며 CAT와 POD의 촉매작용에 의해 분해됩니다.. H2O2, 이는 중요한 활성산소 중 하나일 뿐만 아니라, 활성산소 상호전환의 허브이기도 함. 한편으로는, H2O2는 세포내 핵산을 직접 또는 간접적으로 산화시킬 수 있습니다., 단백질 및 기타 생물학적 거대분자, 세포막을 손상시키고, 따라서 세포의 노화와 붕괴를 가속화합니다.. 반면에, H2O2는 또한 많은 산화 비상 반응의 핵심 규제 요소입니다..

H2O2와 황산티타늄은 노란색의 과산화티타늄 착물을 생성하여 다음과 같은 특성을 흡수합니다. 415 nm.

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비.

분광 광도계/마이크로플레이트 리더, 책상 원심분리기, 조절 가능한 피펫, 마이크로 유리 큐벳/96웰 평면 바닥 플레이트, 이송 피펫, 아세톤 농축 황산 (37% HCl), 모르타르와 얼음.

절차:

나. 샘플 추출:

1. 1. 박테리아 또는 세포 샘플: 박테리아 또는 세포 샘플을 수집하여 원심분리합니다., 상층액을 버린다; 제안됨 5 1mL의 리전트 I로 백만 달러, 초음파 처리로 박테리아와 세포를 분리 (힘 20%, 작업시간 3초, 간격 10초, ~을 위한 30 타임스); 8000g, 4℃에서 원심분리기 10 분, 상등액을 얼음 위에 올려 테스트합니다..
   2. 조직: 0.1g 티슈 추가 1 ml 섭정 1세, 얼음 위에서 완전히 분쇄. 원심분리기, 8000g 및 4℃의 경우 10 분, 상등액을 얼음 위에 올려 테스트합니다..
   3. 혈청: 혈청 100μL 당 비율에 따라 (혈장) 0.9mL 리젠트 I 추가, 잘 섞다. 8000g, 4℃에서 원심분리기 10 분, 상등액을 얼음 위에 올려 테스트합니다..

II. 결정 절차:

• 예열 분광 광도계/마이크로플레이트 판독기 30 분, 파장을 조정하다 415 nm, 증류수로 0을 설정하다.
• 인큐베이트 솔루션 Ⅱ, 37℃에서 III 및 IV(포유류) 또는 25℃ (다른 동물들) 이상의 수욕 10 분 분.
• 표준 작업 솔루션: 96웰 플레이트를 사용하는 경우, 1mmol/mL 표준용액을 아세톤으로 2μmol/mL 표준용액으로 희석합니다., 미량유리 비색법을 사용하여 1mmol/mL 표준 용액을 1μmol/mL 표준 용액으로 희석합니다.
• 다음 목록으로 시약을 추가하세요. (EP 튜브에서의 반응):

시약 (μL)	시험관 (에)	표준 튜브 (처럼)	컨트롤 튜브 (교류)
견본	250
표준 작업 솔루션		250
섭정 1세			250
리젠트 2세	25	25	25
리젠트 3세	50	50	50
4000g, 실온 원심 분리기 10 분, 상층액을 폐기하다.
리젠트 4세	250	250	250

침전물을 용해시키기 위해 Regent IV를 첨가하십시오. (아세톤으로 식물성 색소를 제거할 수 있는 단계 3-5 타임스), 그리고 실온에 놔두세요 5 분, 옮기다 200 μL를 마이크로 유리 큐벳이나 96웰 플레이트에 넣고 흡광도를 측정합니다. 415 nm. 제어 튜브는 한두 번만 테스트하면 됩니다.. ΔAT =AT-AC 계산, ΔAS=AS-AC.

III. 계산 (마이크로플레이트용 리더)

ㅏ. 96-잘 그릇

• 셀량

H2O2(μmol /104 셀) = ΔAT ¼(ΔAS²C)×Vs²(500×Vs│Ve)=0.004 × ΔAT ¼ ΔAS

• 샘플 중량

H2O2(μmol/g)= ΔAT ¼(ΔAS²C)×V1│(Vs²Ve×W)= 2×ΔAT ¼ ΔAS ¼ W

• 단백질 농도

H2O2(μmol/mg prot)= ΔAT ¼(ΔAS²C)×Vs²(Cpr×Vs)= 2×ΔAT¼ ΔAS ¼ Cpr

• 혈청 (혈장)용량

H2O2(μmol/mL)= ΔAT ¼(ΔAS²C)×10=20 × ΔAT¼ ΔAS

500: 세포 또는 박테리아의 양, 104;

씨: H2O2 표준용액의 농도, 2μmol/mL;

대: 샘플량, 0.25 밀리리터; 여: 샘플 중량, g;

베: 추출량, 1 밀리리터;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL;

10: 혈청 희석 배수. [0.1mL 혈청 (혈장)+0.9mL 섭정 1세]¼0.1mL 세럼(혈장)=10.

비. 마이크로 유리 큐벳:

위 식의 표준품 C-2μmol/mL 농도를 C-1μmol/mL로 변경하여 계산합니다..

메모:

1. 솔루션으로, 나는 쉽게 변덕스럽다, 해결책 사용하기 전에 미리 냉각해야 합니다.. 분쇄할 때 얼음 위에서 분쇄해야 합니다..
2. 이 키트의 용액은 쉽게 휘발성입니다.. 일회용 장갑과 마스크를 지참해주세요..
3. 샘플의 흡광도 값이 다음보다 큰 경우 1.1, 측정을 수행하기 전에 시약 I로 샘플을 희석하는 것이 좋습니다..

실험예:

1. 가져가다 0.1 g 하트를 추가하고 1 샘플 처리를 위한 시약 I의 mL. 원심분리 후 상등액을 모두 취한다., 결정절차에 따라 진행. 으로 결정한 후 96 바닥이 평평한 접시, ΔAT=AT-AC=0.083-0.046=0.039 계산, ΔAS=AS-AC=0.824-0.046=0.778. 함량은 샘플 질량에 따라 계산됩니다..

H2O2(μmol/g) =2×ΔAT ¼ ΔAS ¼ W =1μmol/g.

2. 가져가다 0.1 g 차를 추가하고 1 샘플 처리를 위한 시약 I의 mL. 원심분리 후 상등액을 모두 취한다., 결정절차에 따라 진행. 으로 결정한 후 96 바닥이 평평한 접시, ΔAT=AT-AC=0.258-0.003=0.255 계산, ΔAS=AS-AC=0.637-0.003=0.634. 함량은 샘플 질량에 따라 계산됩니다..

H2O2(μmol/g) =2×ΔAT ¼ ΔAS ¼ W =4.5μmol/g.

참고자료：

• 새터필드 C N, 과산화수소에 대한 황산티타늄 방법의 Bonnell A 간섭[제이].

분석 화학, 1955, 27(7): 1174-1175.

• 아민 V M, 올슨 NF. 우유 내 과산화수소의 분광광도 측정[제이]. 낙농과학저널, 1967, 50(4):461-464.
• 시마 YH, 야오 JM, 허우 Y S, 외. 휴면 개시 및 종료 동안 Bombyx 알의 과산화수소 및 카탈라아제 발현의 변화[제이]. 곤충 생화학 및 생리학 기록 보관소, 2011, 77(2): 72-80.

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기술 사양:

검출 한계 ：0.0027 μmol/mL

선형 범위：0.0195-3 μmol/mL