Solarbio 세포 철분 함량 분석 키트 50T | 48에스

세포 철분 함량 분석 키트

메모: 예측하는 것이 필요하다 2-3 공식적인 결정 이전에 큰 차이가 있는 표본. 운영장비: 분광 광도계

고양이 번호: BC5310

크기:50T/48S

구성요소:

용액 추출: 액체 30 밀리리터×1. 2~8℃에서 보관.

시약 I: 액체 15 밀리리터×1. 2~8℃에서 보관. 시약 II: 액체 35 밀리리터×1. 2~8℃에서 보관. 시약 III: 액체 6 밀리리터×1. 2~8℃에서 보관.

기준: 액체 1 밀리리터×1. 2~8℃에서 보관. 1 Fe3+ 표준 용액의 μmol/mL. Fe3+ 표준용액 200μL에 증류수 200μL를 첨가한다. 1 사용 전 μmol/mL, 잘 섞어 Fe3+ 표준용액을 만든다. 0.5 μmol/mL.

제품 설명:

철분은 인체의 필수 미량 원소 중 하나입니다., 헤모글로빈의 주성분인, 미오글로빈, 시토크롬, 및 기타 효소 시스템. 철분은 산소 운반을 돕고 지방 산화를 촉진할 수 있습니다.. 철분 결핍은 빈혈을 일으키기 쉽습니다., 및 대사 장애, 그리고 신체의 면역 기능에 영향을 미칩니다..

Fe3+는 히드록실아민 염산염에 의해 Fe2+로 환원됩니다.. Fe2+는 페난트롤린 일수화물과 반응하여 약산성 조건에서 일종의 주황색 화합물을 형성할 수 있습니다., 에 흡수 피크가 있습니다. 510 nm. 조치에 따르면, 흡광도 520 nm는 세포의 철분 농도를 반영할 수 있습니다..

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:

분광 광도계, 책상 원심분리기, 조절 가능한 피펫, 1mL 유리 큐벳, 세포 초음파 분쇄기, 얼음, 증류수.

절차:

1. 샘플 준비:
2. 원심분리 튜브에 박테리아나 세포를 수집합니다., 원심분리 후 상등액은 폐기. 박테리아의 비율이나 세포수에 따라 (104): 솔루션 볼륨 추출 (밀리리터) ~의 500-1000-1 추출하다. 다음과 같이 제안됩니다. 5 백만 개의 박테리아 또는 세포가 0.5mL의 추출 용액에 해당합니다.. 초음파 처리로 박테리아나 세포를 분리합니다. (얼음 위에 놓음, 초음파 출력 200W, 근무 시간 3초, 간격 7초, 반복하다 30 타임스). 원심분리기 8000 g에 대한 10 4℃에서 1분 동안 불용성 물질 제거, 그리고 상층액은 얼음에 담아두기 전에
3. 샘플이 곰팡이인 경우 초음파 작업 시간이 적절하게 연장될 수 있습니다., 박테리아, 또는 세포가 있는 다른 미생물

II. 결정 절차:

1. 분광 광도계를 예열하십시오. 30 분, 파장을 조정하여 510 nm, 증류수로 0을 설정합니다.
2. 다음과 같은 시약을 추가합니다:

시약 (μL)	시험관 (에)	빈 튜브 (AB)	표준 튜브 (처럼)
견본	100	–	–
증류수	–	100	–
표준 용액 (0.5 μmol/mL)	–	–	100
시약 I	200	200	200
시약 Ⅱ	600	600	600
시약 Ⅲ	100	100	100
잘 섞어주세요, 25℃에 두세요. 10 분. 1mL 유리 큐벳에 1mL의 반응 용액을 취합니다.. 에서 흡광도를 측정합니다. 510 nm, AT로 기록됨, AB, 그리고 그대로. ΔAT = AT-AB, ΔAS=AS-AB. 빈 튜브와 표준 튜브는 한두 번만 테스트하면 됩니다..

III. 세포 철분 함량 계산

• 박테리아/세포 수

세포 철분 함량 (/104개 셀) =(Cs×ΔATnnΔAS)×VE×103×55.845¶500=27.922×ΔATnnΔAS

2) 단백질 집중

세포 철분 함량 (/mg prot)

=(Cs×ΔATnnΔAS)×VE×103×55.845¶(심폐소생술×VE)=27922.5×ΔATΔASCpr

CS: Fe3+ 표준용액의 농도, 0.5μmol/mL;

VE: 솔루션 볼륨 추출, 0.5 밀리리터;

103: 단위 환산 계수, 1 μmol=103nmol;

55.845: Fe의 상대분자량, 55.845/nmol의; 500: 박테리아 또는 세포의 총 수, 5 백만;

심폐소생술: 상청액 샘플 단백질 농도, mg/mL.

메모:

1. ΔAT<01인 경우, 측정하기 전에 샘플 상층액 크기를 늘리는 것이 좋습니다.. AT>1인 경우, 측정 전 샘플 상층액을 증류수로 희석하는 것이 좋습니다.. 계산식을 수정하고.
2. 세포 철분 함량을 단백질로 계산하는 경우 시료 상등액 단백질 농도를 직접 측정해야 합니다.

실험예:

1. 가져가다 5 백만개의 세포, 추가하다 0.5 mL의 추출 용액, 그리고 초음파로 분리. 원심분리하여 상층액을 취한다. 그런 다음 결정 단계에 따라 작동하십시오., ΔAT=AT-AB= 계산 0.171- 0.000=0.171, ΔAS=AS-AB=0.573-0.000=0.573. 결과는 세포 수에 따라 계산됩니다.: 세포 철분 함량 (/104개 셀) =27.922×ΔATnnΔAS=8.333ng/104셀

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