Solarbio 알부민 함량 분석 키트 (Bromocresol 녹색 비색법)

제품개요

사양	세부
유효기간	6 개월
저장	2-8℃
단위	상자
영어 이름	알부민 함량 분석 키트 (Bromocresol 녹색 비색법)
탐지 방법	분광 광도계/마이크로 플레이트 리더
사양	100T/96S

제품 구성 요소

시약 이름	사양	저장 조건
추출 용액	액체 110 밀리리터×1병	2-8℃
시약 1	액체 0.28 ml × 1 vial	2-8℃
시약 2	액체 25 밀리리터×1병	2-8℃
시약 3	액체 0.3 ml × 1 vial	2-8℃
표준 솔루션	액체 1 ml × 1 vial	-20℃

솔루션 준비:

1. 색상 개발 솔루션:
   • 시약을 혼합하여 샘플 수에 따라 색상 개발 솔루션을 준비하십시오., 시약 2, 및 10μL의 비의 시약 3: 990μL: 10μL (1010μl 5 테스트). 철저히 섞어 즉시 사용하십시오.
2. 표준 솔루션:
   • 준비하다 10 Mg/ml 알부민 표준 용액. 사용하기 전에, 200μL의 10 mg/ml 알부민 표준 용액 및 200μL의 추출 용액을 추가하여 5 Mg/ml 알부민 표준 용액. 철저히 섞어 즉시 사용하십시오.

제품 설명:

• 알부민:
  • 간은 인간 혈장의 주요 단백질을 합성합니다.
  • 혈장 삼투압을 유지하는 중요한 영양소.
  • 다양한 영양소와 결합합니다, 호르몬, 그리고 약물.
  • 신체의 영양 상태를 반영합니다.
  • 간 대사 기능에 영향을 미치는 질병을 선별하는 데 사용됩니다 (예를 들어, 경화증, 간 손상, 영양 실조, 악성 종양).
• 탐지 방법:
  • pH에서 4.2 버퍼 솔루션, 혈청 알부민은 양전하를 가지고 있습니다.
  • 비 이온 성 계면 활성제의 존재하에, 알부민은 음으로 하전 된 염료 브로 모 크레솔 녹색과 결합한다.
  • 청록색 단지를 형성합니다.
  • 복합체는 파장에서 흡수 피크를 갖는다. 630 nm.
  • 색상 강도는 알부민의 농도에 직접 비례합니다..
• 반응:
  • 알부민 + Bromocresol Green → 청록색 단지 (630 nm)

메모:

• 실험 전에, 선택 2-3 예상되는 차이가있는 샘플은 예비 실험을 수행하는 것이 좋습니다..
• 시료의 흡광도가 측정범위를 벗어나는 경우, 샘플 부피 희석 또는 증가는 검출에 권장됩니다..

필수 장비 및 소모품 (준비하기 위해):

• 가시 분광 광도계/마이크로 플레이트 리더
• 저온 원심분리기
• 분석 균형
• 마이크로 글라스 큐벳/96- 웰 플레이트
• 조정 가능한 피펫
• 박격포/균질화/초음파 세포 파괴자
• 얼음과 증류수

절차:

샘플 처리 (그에 따라 샘플 볼륨을 조정할 수 있습니다; 특정 비율은 문헌에서 참조 할 수 있습니다):

1. 조직 샘플:
   • 샘플 질량의 비율로 추출 솔루션을 추가하십시오 (g) 추출 용액 부피에 (밀리리터) ~의 1:5~10 (샘플 0.1g의 무게를 높이고 1.0ml의 추출 솔루션을 추가하는 것이 좋습니다.).
   • 얼음 목욕에서 샘플을 균질화합니다, 그런 다음 4 ℃에서 원심 분리하십시오, 8000g에 대한 10 분.
   • 펠릿을 버리고 테스트를 위해 상청액을 얼음에 보관하십시오..
2. 박테리아/세포 샘플:
   • 박테리아/세포 수의 비율로 추출 용액을 추가하십시오 (10^6) 추출 용액 부피에 (밀리리터) 5 ~ 10:1 (1.0ml의 추출 솔루션을 추가하는 것이 좋습니다 5 백만 박테리아/세포).
   • 초음파 세포 붕괴기를 사용하여 얼음 목욕에서 박테리아/세포를 방해 (전원 200W, 3S에 대한 초음파, 간격 7초, 총 시간 5 분).
   • 4℃에서 원심분리기, 8000g에 대한 10 분.
   • 펠릿을 버리고 테스트를 위해 상청액을 얼음에 보관하십시오..
3. 액체 샘플:
   • 직접 측정하십시오.
   • 액체가 탁한 경우, 원심 분리하고 측정을 위해 상청액을 사용하십시오.

1. 가시 분광 광도계/마이크로 플레이트 리더의 준비:
   • 가시 분광 광도계/마이크로 플레이트 리더를 적어도 예열하십시오 30 분.
   • 파장을 설정하십시오 630 nm.
   • 증류수로 가시 분광 광도계를 제로하십시오.
2. 작동 테이블 (마이크로 유리 큐벳/96- 웰 플레이트에 다음 시약을 추가하십시오):

시약 이름 (μL)	시험관	표준 튜브	빈 튜브
견본	20	–	–
표준 솔루션	–	20	–
추출 용액	–	–	20
색상 개발 솔루션	200	200	200

• 잘 섞고 실온에서 서도록하십시오 20 초.
• 각 튜브의 흡광도를 측정하십시오 630 nm, 값을 a_test로 기록합니다, a_standard, 및 A_BLANK.
• ΔA_TEST = A_TEST를 계산하십시오 – A_BLANK, 및 Δa_standard = a_standard – A_BLANK.
• 빈 튜브와 표준 튜브를 측정하면됩니다. 1-2 타임스.

메모: 서있는 시간의 길이는 감지 결과에 영향을 줄 수 있습니다.. 마이크로 유리 큐벳/96- 웰 플레이트에서 직접 반응하는 것이 좋습니다. 20 몇 초 후 흡광도를 측정하십시오.

알부민 함량 계산

1. 샘플 단백질 농도에 의한 계산

알부민 함량 (mg/mg 프로트) = ΔA 측정 × (C 표준 ÷ ΔA 표준) × V 샘플 ÷ (v 샘플 × CPR) = 5 × ΔA 측정 ÷ ΔA 표준 ÷ CPR

2. 샘플 질량에 의한 계산

알부민 함량 (mg/g 질량) = ΔA 측정 × (C 표준 ÷ ΔA 표준) × V 샘플 ÷ (W × V 샘플 ÷ V 샘플 총계) = 5 × ΔA 측정 ÷ ΔA 표준 ÷ w

3. 박테리아/세포 수에 의한 계산

알부민 함량 (Mg/10^6 세포) = ΔA 측정 × (C 표준 ÷ ΔA 표준) × V 샘플 ÷ (v 샘플 × n ÷ v 샘플 총계) = 5 × ΔA 측정 ÷ ΔA 표준 ÷ n

4. 액체 부피에 의한 계산

알부민 함량 (mg/mL) = ΔA 측정 × (C 표준 ÷ ΔA 표준) × V 샘플 ÷ V 샘플 = 5 × ΔA 측정 ÷ ΔA 표준

정의:

• C 표준: 표준 튜브 농도, 5 mg/mL;
• v 샘플: 샘플량 추가됨, 0.02밀리리터;
• v 샘플 총: 총 추출물이 추가되었습니다, 1밀리리터;
• 심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL;
• 여: 샘플 질량, g;
• N: 박테리아/세포의 총 수, 10^6

노트:

1. ΔA_TEST보다 적은 경우 0.010 또는 테스트 튜브의 흡광도는 빈 튜브의 흡광도에 가깝습니다., 측정 전에 샘플 부피를 늘릴 수 있습니다. ΔA_TEST보다 큰 경우 0.5, 측정 전에 추출 용액으로 샘플 상청액을 적절하게 희석하는 것이 좋습니다.. 참고 계산 공식을 동시에 조정하려면.
2. 컬러 개발자를 추가 한 후 샘플이 탁도가되는 경우, 측정 전에 추출 용액으로 샘플 상청액을 적절하게 희석하는 것이 좋습니다.. 참고 계산 공식을 동시에 조정하려면.

실험예:

1. 20μL의 인간 혈청 샘플을 복용하십시오, 희석하십시오 10 추출 솔루션이있는 시간, 측정 단계를 따르십시오, 96- 웰 플레이트를 사용하여 측정하십시오. 계산: ΔA_TEST = A_TEST – a_blank = 0.426 – 0.124 = 0.302, Δa_standard = a_standard – a_blank = 0.406 – 0.124 = 0.282. 액체 부피에 따라 계산됩니다: 알부민 함량 (mg/mL) = 5 × ΔA_TEST ÷ ΔA_STANDARD × 10 (희석 계수) = 53.546 mg/mL.